藏藥柳茶提取物對S180體內(nèi)生長的抑制作用及抑瘤機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察藏藥柳茶提取物對小鼠肉瘤S180在體內(nèi)生長的抑制作用，并通過對荷瘤鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2和TNF-α的產(chǎn)生及對腫瘤組織P53、Bcl-2基因表達(dá)的檢測探討其抑瘤機(jī)理，為該藥的開發(fā)利用提供科學(xué)的理論依據(jù)。 方法：將清潔級(jí)昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為六組，每組10只：1)正常對照組，動(dòng)物不接種腫瘤，以生理鹽水灌胃，0.2ml/只/d；2)腫瘤對照組，接種腫瘤，以生理鹽水灌胃，0.2ml/只/d；3)柳茶高劑量組，接種腫瘤，以6

2、g向1的柳茶溶液灌胃，0.2ml/只/d；4)柳茶中劑量組，接種腫瘤，以3g/ml的柳茶溶液灌胃，0.2ml/只/d；5)柳茶低劑量組，接種腫瘤，以1.5g/m1的柳茶溶液灌胃，0.2ml/只/d；6)陽性對照組，接種腫瘤，每只以環(huán)磷酰胺20mg/kg/d腹腔注射給藥。除正常對照組外，采用S180腹水型肉瘤細(xì)胞株建立小鼠腫瘤模型。實(shí)驗(yàn)過程中，觀察小鼠的生存質(zhì)量，活動(dòng)和精神狀況，皮毛光潔度，腫瘤生長的潛伏期，生長速度及局部腫塊破潰情況。腫

3、瘤生長14天后斷頸處死，小心剝離腫瘤組織，并立刻稱重后計(jì)算抑瘤率。用10％福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色，烘干，光鏡下觀察。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)SABC法(鏈霉親和素—生物素—過氧化物酶技術(shù))測定腫瘤組織中P53和Bcl-2的表達(dá)。將剝離腫瘤組織后的小鼠在無菌條件下剝?nèi)∑⑴K，制備單個(gè)脾細(xì)胞懸液，用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))雙抗體夾心法測定荷瘤鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-2和TNF-a水平。結(jié)果：中、高劑量的柳茶對小鼠體內(nèi)的Si

4、80肉瘤生長有明顯的抑制作用，抑瘤率分別達(dá)到了44.6％和40.0％；柳茶各劑量組腫瘤潛伏期較長，約5天方可觸及腫塊，表皮破潰出血現(xiàn)象較輕，小鼠精神狀態(tài)及皮毛粗光澤度均好于腫瘤對照組。腫瘤對照組和低劑量組鏡下見腫瘤細(xì)胞生長活躍，有部分壞死灶，病理性核分裂像較為多見；高、中劑量組和陽性對照組鏡下可見多處瘤細(xì)胞的大片壞死現(xiàn)象，并見到大量腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)核濃縮。中、高劑量的柳茶能促進(jìn)IL-2和TNF-a分泌，IL-2與TNF-α的含量分別為76.

5、100±4.557、80.400±4.719pg/ml和41.447±16.373、44.302±13.724pg/ml，與腫瘤對照組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中、高劑量的柳茶能下調(diào)mtP53基因在腫瘤組織中表達(dá)，陽性率為54％和52％；高劑量的柳茶能下調(diào)Bcl-2基因在腫瘤組織中表達(dá)，陽性率為82％，與腫瘤對照組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：1.藏藥柳茶提取物對小鼠移植性腫瘤S180在體內(nèi)的生長具有顯著的抑制作用。 2.其