大鼠胚胎皮膚無瘢痕性愈合機制的實驗研究.pdf

1、先天性唇腭裂是我國新生兒中最常見的先天性畸形之一，唇部遺留的手術瘢痕將影響整個面部的協(xié)調美觀，腭裂修復術后硬腭裸露骨面遺留的瘢痕攣縮將使患者上頜骨的生長發(fā)育受限，加重唇腭裂術后繼發(fā)畸形的外觀丑陋程度，加重患者的精神心理負擔，不利于唇腭裂序列治療總體目標的實現(xiàn)。 瘢痕的產生是由于局部皮膚、粘膜遭受手術創(chuàng)傷后，不能完全達到組織學的再生，為了恢復組織完整性而以結締組織替代進行修復，并引起外觀形態(tài)和/或功能改變的產物。目前，尚未找到一種

2、理想的方法來控制瘢痕增生。 1979年，Rowlatt首次報道在人類胚胎發(fā)現(xiàn)無瘢痕性愈合(ScarlessHealing)，隨后，在鼠、兔、羊等其他動物胚胎中也發(fā)現(xiàn)了類似的現(xiàn)象。胚胎無瘢痕性愈合是胚胎在特定的時期受到創(chuàng)傷后，以周圍正常組織再生完成修復，是胚胎特有的性質，其發(fā)生機理尚不清楚。通過對唇腭裂動物模型行子宮內修復術發(fā)現(xiàn)，手術后的胚胎局部傷口完全愈合，沒有瘢痕組織形成，并且上頜骨的生長發(fā)育正常。 如果闡明胚胎無瘢痕

3、性愈合的機理，就有可能使成體組織瘢痕性愈合向類似于胚胎樣的無瘢痕性愈合轉變，使瘢痕的治療得到突破，極大地提高唇腭裂序列治療效果。 本研究首先建立無瘢痕性愈合的SD大鼠胚胎模型，通過熒光定量PCR，檢測TGF-β1、TGF-β3、CTGF、和纖維調節(jié)素在胚胎無瘢痕性愈合以及瘢痕性愈合中表達的差異，進而以纖維調節(jié)素為研究對象，通過RNA干擾的方法，構建纖維調節(jié)素RNA干擾的穩(wěn)定表達載體，通過細胞核轉染儀，轉染第16天和第18天的胚胎

4、成纖維細胞，運用定量PCR檢測纖維調節(jié)素mRNA干擾后，TGF-β1、TGF-β3和CTGF表達的變化情況，研究纖維調節(jié)素在胚胎無瘢痕性愈合中所起的作用。 根據(jù)實驗結果得到以下結論：1.大鼠胚胎第16-18天是胚胎皮膚由無瘢痕性愈合向瘢痕性愈合的轉變期，在轉變期之前的胚胎皮膚以特異的無瘢痕性愈合完成創(chuàng)傷修復，轉變期之后的胚胎皮膚以類似成體的瘢痕性愈合完成創(chuàng)傷修復。 2.在胚胎無瘢痕性愈合向瘢痕性愈合的轉變過程中，TGF-

5、β1、TGF-β3、CTGFmRNA表達水平沒有顯著性差異；纖維調節(jié)素的mRNA表達水平隨著胚胎的增長，逐漸降低。 3.纖維調節(jié)素在早期胚胎無瘢痕性愈合傷口中表達迅速上升，并持續(xù)高表達，而在晚期胚胎瘢痕性愈合傷口中，纖維調節(jié)素一直處于低水平表達。 4.在第16天和第18天胚胎成纖維細胞纖維調節(jié)素mRNA被干擾后，TGF-β1和CTGF出現(xiàn)表達上升的趨勢，TGF-β3出現(xiàn)表達下降的趨勢。 綜上所述，大鼠胚胎從無瘢痕

6、性愈合向瘢痕性愈合的轉變發(fā)生在胚胎第16-18天。纖維調節(jié)素在大鼠胚胎無瘢痕性愈合中起重要作用。在轉變過程中，纖維調節(jié)素的mRNA表達下降。在無瘢痕性愈合的傷口中，纖維調節(jié)素的表達持續(xù)升高，而在瘢痕性愈合的傷口中，纖維調節(jié)素的表達沒有明顯變化。對胚胎成纖維細胞中纖維調節(jié)素進行有效的RNA干擾后，TGF-β1和CTGF出現(xiàn)表達上升的趨勢，TGF-β3出現(xiàn)表達下降的趨勢。這提示纖維調節(jié)素可能通過調節(jié)TGF-β1、TGF-β3和CTGF的表達