SIRT1和Phospho-SIRT1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　沉默信息調(diào)節(jié)因子2(sir2)是最初在芽殖酵母中發(fā)現(xiàn)的一種抗衰老基因，其編碼的小分子蛋白Sirt2具有NAD+依賴的組蛋白去乙酰化酶活性，與壽命延長(zhǎng)相關(guān)。SIRT1是Sirt2在哺乳動(dòng)物中同源性最高的一個(gè)類似物，它參與細(xì)胞的能量代謝、增殖衰老、炎性反應(yīng)、神經(jīng)保護(hù)、腫瘤形成等多個(gè)過程。但是關(guān)于SIRT1在腫瘤中的研究，卻存在很多爭(zhēng)議性——SIRT1在腫瘤中發(fā)揮促癌作用還是抑癌作用？SIRT1定位于細(xì)胞核內(nèi)還是細(xì)胞漿內(nèi)？S

2、IRT1亞細(xì)胞定位是否與核漿穿梭有關(guān)？目前對(duì)SIRT1的這些爭(zhēng)議性研究的具體機(jī)制尚不明確，因此有必要進(jìn)行深入探討。
　　有報(bào)道指出，磷酸化能夠調(diào)控SIRT1的去乙?；钚院秃藵{穿梭，但是關(guān)于Phospho-SIRT1在腫瘤中的研究較少見，因此我們著重探討了Phospho-SIRT1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況及亞細(xì)胞定位情況。
　　目的:
　　本課題通過研究SIRT1、Phospho-SIRT1在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中

3、的表達(dá)水平及亞細(xì)胞定位情況，以及SIRT1在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的轉(zhuǎn)錄水平，分析SIRT1、Phospho-SIRT1與結(jié)直腸癌各臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系，分析Phospho-SIRT1與SIRT1之間的相關(guān)性，探討磷酸化在結(jié)直腸癌中發(fā)揮的作用。
　　方法:
　　采用免疫組織化學(xué)方法和Western blot方法檢測(cè)結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織中SIRT1和Phospho-SIRT1蛋白表達(dá)情況及亞細(xì)胞定位情況;采用R

4、eal-Time PCR方法檢測(cè)結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中SIRT1 mRNA水平。
　　結(jié)果:
　　1.SIRT1在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中均完全定位于細(xì)胞核內(nèi)，無胞漿定位;SIRT1在癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，并與患者的低年齡、高TNM分期、突變型P53蛋白缺失相關(guān)。
　　2.Phospho-SIRT1在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中均完全定位于細(xì)胞核內(nèi)，無胞漿定位;Phospho-SIRT1在癌組織

5、中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，且與Ki67蛋白相關(guān)。
　　3.Phospho-SIRT1與SIRT1在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)均呈正相關(guān)，Phospho-SIRT1/SIRT1比值在癌組織中高于癌旁正常組織。
　　4.SIRT1在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的轉(zhuǎn)錄水平無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.SIRT1在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，并與患者的低年齡、高TNM分期、突變型P53蛋白缺失相關(guān)，即SIRT

6、1在癌組織中既是有利因素也是不利因素，提示SIRT1在結(jié)直腸癌形成過程中可能具有兩面性。
　　2.Phospho-SIRT1在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，并與Ki67蛋白相關(guān)，即Phospho-SIRT1與細(xì)胞的增殖有關(guān)，提示Phospho-SIRT1可能參與了結(jié)直腸癌的形成。
　　3.Phospho-SIRT1與SIRT1在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)均呈正相關(guān)，提示Phospho-SIRT1可能代表了SIRT1在組織中

7、的作用;Phospho-SIRT1/SIRT1比值在癌組織中高于癌旁正常組織，提示SIRT1的磷酸化在結(jié)直腸癌中可能起到了促進(jìn)腫瘤形成的作用。
　　4.SIRT1和Phospho-SIRT1均定位于細(xì)胞核內(nèi)，無胞漿定位情況，即實(shí)驗(yàn)未觀察到磷酸化對(duì)SIRT1亞細(xì)胞定位的影響，可能Phospho-SIRT1并不能代表SIRT1的核漿穿梭部分。
　　5.SIRT1 mRNA在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平無明顯差異，說明S