美味獼猴桃根保肝活性及成分的研究.pdf

1、美味獼猴桃(A.．deliciosa C F. lianget A R．Fetguson)為獼猴桃科獼猴桃屬植物，廣泛分布在亞洲各國，其果實有其很好的營養(yǎng)和醫(yī)藥價值。其根在民間常用于治療肝炎、水腫、跌打損傷、風(fēng)濕關(guān)節(jié)等病。已有資料表明美味獼猴桃根的乙醇粗提物在體內(nèi)外有抗腫瘤作用，但對其根的提取物是否有保肝作用及保肝的主要成分尚未見詳細的報道，本文研究其根保肝作用活性成分，對其根的保肝作用提供有力的科學(xué)依據(jù)，對于闡明其根保肝作用、開發(fā)新型

2、保肝藥品有重要的學(xué)術(shù)意義和實踐價值。 本文主要利用四氯化碳(CCl<,4>)肝損傷模型來跟蹤各提取物的保肝活性，利用硫氰酸鐵(FTC)法進行脂質(zhì)的過氧化實驗，并對分離純化各部分進行跟蹤研究。在對提取溶劑和提取方法的篩選中表明，乙醇提取物抗氧化和保肝活性均大于其它提取物的活性(P<0.05)；并證明了其作用效果與加入劑量呈一定的相關(guān)性，當(dāng)乙醇提取物的用量達120 mg/kg時，CCl<,4>損傷的小鼠血清中的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)

3、、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性相對于模型組分別降低65.67％和85.53％，脂質(zhì)過氧化水平(MDA)降低52.26％，還原型谷光甘肽(GSH)升高55.83％；其作用效果也被肝的組織病理學(xué)檢查所確認。不同的提取方法所得的提取物均有顯著的抗氧化性能和對CCl<,4>肝損傷小鼠的保肝作用(p<0.01)；但是微波提取速度快，溶劑用量少，不影響提取物的保肝活性。 將獼猴桃根乙醇提取物采用不同極性的溶劑分級萃取，分別采用抗氧化性試驗和

4、CCl<,4>肝損傷試驗進行活性測定。結(jié)果表明：乙酸乙酯萃取物(FrA)和正丁醇萃取物(FrB)具有較高的抗氧化性能和保肝活性(p<0.05)。 建立了TLC-分光光度法測定總?cè)坪亢蚑LC-HPLC法測定提取物中齊墩果酸(oleanolic acid)含量的方法。找到了薄層色譜分離三萜的適宜展開劑組成為：氯仿+甲醇+水(70+30+1)，最佳的顯色劑為200 ml/L硫酸甲醇溶液+15 g/L的香草醛甲醇溶液(1+1)的混合

5、液。分光光度法測定總?cè)频倪m宜條件為：50 g/L香草醛醋酸溶液0.3 ml，高氯酸1 ml，60℃反應(yīng)15 min，測定波長540 nm；HPLC測定提取物中的oleanolic acid含量的適宜的條件為： LunaC<,18>柱，流動相：乙腈+甲酸+水(60+0.08+39.92)，流速1.0ml/min，UV檢測，檢測波長206 nm，進樣量10μl。經(jīng)驗證，兩種方法都具有較高的精密度、準(zhǔn)確性及可靠性。對各分級提取物分析表明，F(xiàn)

6、rA和FrB中的主要成分為三萜化合物。 采用改進的實驗室微波新裝置，對提取獼猴桃根中的總?cè)频墓に囘M行了研究。并用響應(yīng)面法優(yōu)化出最佳的提取工藝條件為：微波功率450 W下，獼猴桃根粉碎度40目，微波處理前浸泡30 min，料液比1:15，乙醇體積分數(shù)63％，提取溫度47℃，提取時間30 min，在此條件下總?cè)埔淮翁崛÷士蛇_85.13％。并進行了驗證實驗。采用大孔樹脂對三萜化合物進行了純化。通過對五種樹脂的篩選實驗，確定了D10

7、1作為純化獼猴桃根中總?cè)苹衔锏臉渲?。建立了D101靜態(tài)吸附總?cè)频膭恿W(xué)方程，確立了D101純化總?cè)苹衔锏暮线m工藝條件。樹脂純化后總?cè)萍兓稊?shù)達到1.78倍，總?cè)频幕厥章蔬_到88.65％。經(jīng)TLC檢識，樹脂純化后的產(chǎn)品中主要成分(其R<,f>值為0.87、0.82、0.75、0.67、0.51、0.42、0.26)包含了乙酸乙酯和正丁醇萃取物中的主要成分。 采用硅膠柱層析對樹脂純化總?cè)七M一步的分離和活性測定。結(jié)果表

8、明：氯仿+甲醇(7+3～6+4)的洗脫液Fr(3)部分具有較高的抗氧化和保肝活性。經(jīng)TLC檢識，F(xiàn)r(3)顯示四個主要的點(其R<,f>值為0.87、0.82、0.75、0.67)和幾個小點。這些點的R<,f>值與乙酸乙酯和正丁醇萃取物中的主要三萜成分相同，說明他們是保肝活性的主要單體化合物。 采用Sephadex-LH-20柱和ODS柱對單體化合物多次分離純化。結(jié)果得到四個單體化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。其R<,f>值分別為0.87

9、、0.82、0.75、0.67。通過采用UV、MS、<'1>HNMR．<'13>C NMR和DEPT-NM等方法進行分析，結(jié)構(gòu)鑒定，它們分別為齊墩果酸(oleanolicacid)、熊果酸(ursolic acid)、2α,3α,23-三羥基-12-烯-28-烏蘇酸(2α，3α，23-trihydroxy-urs-12-en-28-oic acid)、2α,3β，19,23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸(2α,3β，19,23-tet