化療引起的機體損傷和骨髓移植對Lewis肺癌血管生成及生長的影響.pdf

1、背景和目的；腫瘤獲得血供是腫瘤形成過程中一個極為重要的階段和條件，腫瘤內新血管的生成，依賴于內皮細胞的增殖和遷移。以往認為，腫瘤的血管生成是通過分化完全的血管內皮細胞從業(yè)已存在的血管中增殖、遷徙和再塑而成；但近來的研究發(fā)現(xiàn)：腫瘤的血管生成也有骨髓干細胞的參與。骨髓里的干細胞在某些因子，例如：粒細胞集落刺激因子(granulocytecolony-stimulatingfactor,G-CSF)、血小板反應蛋白等的刺激下，分化成為血管內皮

2、前體細胞(endothelialprogenitorcells,EPC)；EPC又在其他因子的作用下進入外周血循環(huán)，在生理和病理的血管生成處分化成血管內皮細胞。因此，現(xiàn)在認為：腫瘤的血管生成過程中，既有局部血管內皮細胞的增殖、遷移、再塑，又有來自骨髓的血管內皮前體細胞的分化參與。 臨床上，在最大耐受劑量(maximumtolerateddose，MTD)化療的間歇期，促紅細胞生成素(erythropoietin,EPO)和G-C

3、SF等藥物常用來促使病人從MTD化療導致的骨髓抑制中恢復，但在一些臨床試驗中發(fā)現(xiàn)：MTD化療后使用這些刺激因子的病人反而預后更差，有學者推測，這是因為EPO和G-CSF等在動員骨髓造血前體細胞進入外周血并進而分化為成熟的紅細胞和白細胞的同時，也加速了EPC的動員，促進了腫瘤的血管生成，導致腫瘤生長。 基于以上理論，本實驗以C57BL/6小鼠為研究對象，先給予每組小鼠不同劑量的環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)化

4、療，第7天對其中接受最大耐受劑量化療的一組小鼠行骨髓移植，然后，第12天在每組小鼠體內接種Lewis肺癌細胞，觀察Lewis肺癌的生長情況，通過檢測腫瘤組織中的微血管密度(microvesseldensity,MVD)和增殖核抗原(proliferatingcellsnuclearantigen,PCNA)，來分析化療引起的不同程度的機體損傷和骨髓對Lewis肺癌血管生成及生長的影響，為通過阻止腫瘤血管形成來抑制腫瘤生長的治療策略的進一

5、步發(fā)展提供實驗依據(jù)。 方法；1小鼠分組及給藥將C57BL/6小鼠隨機分為4組，每組10只：(1)MTD化療組CTX150mg/kgIPd1,3,5，(2)MTD化療+骨髓移植組CTX150mg/kgIPd1,3,5,第7天接受骨髓移植，(3)小劑量化療組CTX10mg/kgIPd1,3,5,7,9,11，(4)對照組N-S0.15mLIPd1,3,5。 2骨髓移植獲取供體C57BL/6小鼠的骨髓，調整有核細胞濃度至10×

6、106/mL，MTD化療+骨髓移植組小鼠于化療第7天經尾靜脈注射0.3mL的細胞懸液。 3接種腫瘤細胞于化療第12天獲取Lewis肺癌腫瘤細胞，調整細胞濃度至5×106/mL，在每只小鼠右腋窩內側皮下注射0.2mL細胞懸液。 4小鼠一般狀況及外周血白細胞數(shù)目變化在實驗過程中觀察小鼠的體重、皮毛變化，活動和反應情況，每隔一天測量一次體重；在不同時間點對小鼠外周血白細胞進行計數(shù)，并繪制白細胞數(shù)目變化曲線。 5觀察腫瘤

7、生長情況于接種后第6天用游標卡尺測量腫瘤的最長徑(a)和與其垂直的最短徑(b)，以后每天于同一時間測量，按公式V=0.52ab2計算瘤塊體積，繪制體重及體積變化曲線。 6實驗終止時，剝離每只小鼠的皮下移植瘤，采用免疫組化S-ABC法測定腫瘤組織中微血管密度(MVD)和增殖細胞核抗原(PCNA)指數(shù)。 7統(tǒng)計學處理應用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，實驗數(shù)據(jù)采用方差分析和S-N-K檢驗。以α=0.05為檢驗水準。

8、 結果；1.MTD化療后可觀察到小鼠皮毛失去光澤，行動遲緩，反應遲鈍，外周血白細胞數(shù)和體重明顯下降，與單純MTD化療組小鼠相比，MTD化療+骨髓移植組小鼠的一般狀況恢復較快，小劑量化療組和對照組小鼠一般狀況無明顯改變。 2.小劑量化療組和對照組小鼠在接種后第6天即可測到腫瘤，且腫瘤生長較快；MTD化療+骨髓移植組小鼠在接種后第7天可測到，腫瘤初期生長較慢，后期生長較快，單純MTD化療組小鼠在接種后第8天可測到腫瘤，腫瘤生長

9、較MTD化療+骨髓移植組慢，實驗終止時皮下移植瘤的體積仍小于MTD化療+骨髓移植組小鼠的皮下移植瘤體積。 3.單純MTD化療組的MVD值為17.85±4.06，MTD化療+骨髓移植組、小劑量化療組和對照組的MVD值分別為33.46±3.25，34.11±4.32，36.91±3.03，MTD化療組的MVD值與其余三組的MVD值相比有顯著性差異(P＜0.05)；小劑量化療組、MTD化療+骨髓移植組和對照組的MVD值相比無顯著性差異

10、(P＞0.05)。 4.單純MTD化療組的PCNA指數(shù)為41.03±6.03，MTD化療+骨髓移植組、小劑量化療組和對照組的PCNA指數(shù)分別73.45±5.63，75.97±5.64，78.61±5.28，MTD化療組的PCNA指數(shù)與其余三組的PCNA指數(shù)相比有顯著性差異(P＜0.05)；MTD化療+骨髓移植組、小劑量化療組和對照組的PCNA指數(shù)相比無顯著性差異(P＞0.05)。 結論；1.MTD化療可引起較明顯的毒性反