骨髓移植修復(fù)放療損傷小鼠卵巢的實驗研究.pdf

1、隨著對腫瘤放療領(lǐng)域研究的不斷深入，腫瘤患者預(yù)后明顯改善，患者生存率明顯提高。據(jù)美國1995年～2005年間數(shù)據(jù)統(tǒng)計，所有診斷浸潤癌患者(無論年齡大小)5年生存率接近60％。其中年輕女性腫瘤患者5年生存率遠高于60％，治療所致的醫(yī)源性損害已逐漸得到重視。如放療常見的一個并發(fā)癥卵巢毒性引起的早絕經(jīng)和不育嚴重影響患者的生活質(zhì)量和自信。近年有關(guān)放療對卵巢損害的機制以及預(yù)防卵巢受損的研究受到了腫瘤學、生殖醫(yī)學、放射防護學等學科的關(guān)注，本文就利用骨

2、髓細胞的發(fā)育潛能來修復(fù)放療損傷卵巢組織的可能性及其機制進行了初步實驗研究。 本研究的目的是通過觀察骨髓移植對放療引起的卵巢受損小鼠的修復(fù)效果，比較同性/異性骨髓移植對放射引起的卵巢損傷修復(fù)的差異，以及推測其損傷修復(fù)機制。觀察的指標包括：血清中FSH、E2含量，卵巢系數(shù)(OI)，卵巢組織的組織形態(tài)及是否出現(xiàn)動情周期。 本論文分為三個部分。第一部分為研究骨髓移植是否對放療引起的小鼠卵巢損傷有恢復(fù)作用；第二部分為比較同性或異性

3、骨髓移植對放療引起的小鼠卵巢損傷的修復(fù)是否有差異；第三部分為關(guān)于放療損傷卵巢組織功能恢復(fù)機制的研究。各部分的實驗方法如下： 1.骨髓移植對放療引起的小鼠卵巢損傷修復(fù)作用的實驗中，我們采用140只SPF級8～10周齡雌性昆明小鼠，除20只作為骨髓移植供體，其余120只隨機分為平均三組：正常對照組，單次放療組，骨髓移植組。正常對照組，不采取任何措施；單次放療組，單次放療后不采取任何措施；骨髓移植組，單次放療后24h進行骨髓移植。骨髓

4、移植后于第1，5，15，30天四個時間點分別從各組中取10只小鼠檢測血清中E2，F(xiàn)SH水平并測定OI，取卵巢組織做病理切變觀察；采用析因方差方法進行統(tǒng)計。 2.同性或異性骨髓移植對放療引起的小鼠卵巢損傷的修復(fù)實驗中，我們采用175只SPF級8～10周齡雌性昆明小鼠，15只SPF級8～10周齡雄性昆明小鼠。其中15只雄性小鼠作為雄性骨髓移植供體，15只雌性小鼠作為雌性骨髓移植供體。余下160只雌性小鼠隨機分為四組：正常對照組，單次

5、放療組，同性骨髓移植組，異性骨髓移植組。正常對照組，不采取任何措施；單次放療組，單次放療后不采取任何措施；異性骨髓移植組，單次放療后24h內(nèi)移植雄性小鼠骨髓細胞；同性骨髓移植組，單次放療后24h內(nèi)移植雌性小鼠骨髓細胞。于骨髓移植后第1，5，15，30天每個時間點分別從各組中取10只小鼠檢測血清中E2，F(xiàn)SH水平，并測定OI，并取卵巢組織做病理切變觀察；采用析因方差方法進行統(tǒng)計。 3.骨髓細胞移植到放療后小鼠的體內(nèi)實驗中，我們采用

6、了22只雌性ICR小鼠，其中10只作為熒光骨髓移植受體，6只作為單次放療組，6只作為空白對照組。另有5只帶有綠色熒光標記的轉(zhuǎn)基因ICR小鼠作為骨髓移植供體。單次放療組單次放療后不采取任何措施；空白對照組，不采取任何措施；骨髓移植組，單次放療后24h移植熒光小鼠骨髓細胞。骨髓移植后的第15，30天分別取對照組3只，單次放療組3只，熒光骨髓移植組5只小鼠的卵巢組織做冰凍切變觀察是否出現(xiàn)帶有熒光標記的卵細胞。 實驗結(jié)果如下：

7、1.放射后放療后骨髓移植組(E2：10.83ng/L，F(xiàn)SH：2.94IU/L，OI：2.16)，單次放療組(E210.30ng/L，F(xiàn)SH2.84IU/L，OI：2.24)的激素水平、卵巢系數(shù)與正常組(E210.83ng/L，F(xiàn)SH2.42IU/L，OI：2.70)差異顯著，在放療后第15、30天，單次放療組成熟卵泡數(shù)量減少，卵巢血管增生，有纖維化；骨髓移植組可見原始卵泡，初級卵泡，次級卵泡，成熟卵泡，血管較豐富。血清中E2、FSH水

8、平及OI在放療后第15、30天骨髓移植組(E223.02ng/L，F(xiàn)SH2.59IU/L，OI：2.60；E223.92ng/L，F(xiàn)SH2.24IU/L，OI：2.76)與單次放療組(E218.17ng/L，F(xiàn)SH2.98IU/L，OI：2.34；E219.62ng/L，F(xiàn)SH3.05IU/L，OI：2.47)有顯著性差異。(血清中E2、FSH水平及卵巢系數(shù)在第15天時的F值分別為15.676，2.854，27.215；P值分別為0.0

9、00，0.000，0.045；第30天時的F值分別為12.610，15.657，19.709；P值分別為0.000，0.000，0.000)。 2.放療后初期同性骨髓移植組、異性骨髓移植組、單次放療組的E2，F(xiàn)SH，OI分別為(12.12ng/L，3.59IU/L，2.23；12.10ng/L，3.56IU/L，2.27；10.38ng/L，3.29IU/L，2.22)，與正常對照組(25.35ng/L，2.36IU/L，2.8

10、3)差異顯著；在骨髓移植第15、30天，單次放療組、異性骨髓移植組成熟卵泡數(shù)量持續(xù)減少，卵巢血管增生，有纖維化，較實驗初期未見明顯好轉(zhuǎn)；同性骨髓移植組可見原始卵泡，初級卵泡，次級卵泡，成熟卵泡，血管較豐富。在第15天同性骨髓移植組(E218.38ng/L，F(xiàn)SH3.10IU/L，OI：2.59)血清中E2、FSH水平及OI與單次放療組(E210.83ng/L，F(xiàn)SH2.42IU/L，OI：2.70)、異性移植組(E212.54ng/L，

11、FSH3.88IU/L，OI：2.46)有顯著性差異，與正常對照組(E225.39ng/L，F(xiàn)SH2.39IU/L，OI：2.82)接近，并可以繼續(xù)好轉(zhuǎn)至30日。(血清中E2、FSH水平及OI在第15天時的F值分別為124.038、95.431、15.346；P值分別為0.000、0.000、0.000；在第30天時的F值分別為180.967、190.495、10.968；P值分別為0.000、0.000、0.000)3.骨髓移植后第1