MiR-3665、miR-375和miR-4530在食管鱗狀細胞癌中甲基化及其與預(yù)后的研究.pdf

1、目的：
　　通過檢測食管鱗癌患者癌組織與癌旁組織中 hsa-miR-3665、hsa-miR-375和hsa-miR-4530基因啟動子區(qū)的甲基化水平，來探討 hsa-miR-3665、hsa-miR-375和hsa-miR-4530分別與食管鱗癌患者的臨床資料及預(yù)后的關(guān)系，找出影響食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān)的microRNA，為食管鱗癌預(yù)后判斷提供依據(jù)。
　　方法：
　　1、收集145例2012年07月至2014年

2、07月福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院、漳州市第一醫(yī)院和安溪縣醫(yī)院就診的食管鱗狀細胞癌患者的新鮮癌組織與癌旁組織（距離癌組織＞3cm），以及相應(yīng)的臨床資料和隨訪資料,隨訪時間至2015年05月09日止。
　　2、設(shè)計 hsa-miR-3665、hsa-miR-375和hsa-miR-4530基因甲基化引物，采用甲基化敏感性高分辨率溶解曲線檢測上述食管鱗癌患者的癌組織與癌旁組織的甲基化水平。結(jié)合上述臨床資料和隨訪資料，找出與食管鱗癌患者臨床

3、參數(shù)及預(yù)后有關(guān)的microRNA。
　　3、MTT法測定濃度為5μM、10μM、20μM、50μM和100μM的EGCG作用后Eca109細胞生長情況，運用析因分析其與濃度、時間關(guān)系；以濃度為20μM的EGCG作用食管癌Eca109細胞，實時定量RT-PCR測定篩出的microRNA表達量，檢測20μM EGCG與甲基化抑制劑1μM DAC兩者的甲基化水平。
　　結(jié)果：
　　1、設(shè)計出四對相應(yīng)的甲基化引物，其中 hsa

4、-miR-3665(2)中甲基化水平高的癌組織相應(yīng)的癌旁組織甲基化水平也高，關(guān)聯(lián)性分析得出差異有統(tǒng)計學意義（χ2=14.800，P=0.022）。
　　2、與臨床資料的比較，臨床參數(shù)中 TNM分期與 hsa-miR-3665(2)甲基化水平有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.024)，大多患者處于TNM分期II期和III期且甲基化水平處于50％～100%之間；殘端受侵、TNM分期、術(shù)后感染、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與 hsa-miR-375甲基化水

5、平有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.024，P=0.016，P<0.001和P=0.017)，無殘端受侵、無術(shù)后感染、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比有殘端受侵、有術(shù)后感染、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者多且甲基化水平高，TNM分期情況同 hsa-miR-3665(2)；而食管鱗癌患者浸潤程度、殘端受侵、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與 hsa-miR-4530甲基化水平有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.026，P=0.038和P=0.015)，大多患者處于浸潤程度T3且甲基化水平處于0%～

6、50%，殘端受侵、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移甲基化情況與hsa-miR-375相同。
　　3、hsa-miR-3665(2)和hsa-miR-375中各甲基化水平組間two-stage檢驗結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計學意義（TSPV=0.014，TSPV<0.001）。進行 COX多因素回歸模型分析結(jié)果顯示：miR-4530甲基化水平與預(yù)后差異有統(tǒng)計學意義（P=0.040）。
　　4、EGCG在不同作用時間和不同作用濃度下，對食管癌細胞抑制情況不同。

7、實時定量RT-PCR顯示作用48 h和72 h后，EGCG和DAC的hsa-miR-3665(2)表達上調(diào)，甲基化水平的檢測結(jié)果也顯示與對照相比兩者在48 h和72 h時甲基化水平均降低。
　　結(jié)論：
　　1、hsa-miR-3665在食管鱗癌癌組織與癌旁組織的甲基化水平存在關(guān)聯(lián)性，且甲基化水平高的癌組織相應(yīng)的癌旁組織甲基化水平也高。
　　2、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌hsa-miR-375和hsa-miR-4530甲

8、基化水平比有轉(zhuǎn)移的高。hsa-miR-3665(2)和hsa-miR-375與TNM分期有關(guān)，大多患者在TNM分期II期和III期且甲基化水平處于50%～100%。hsa-miR-4530甲基化水平與浸潤程度有關(guān)，大多患者在浸潤程度T3且甲基化水平處于0%～50%。無殘端受侵的食管鱗癌hsa-miR-375和hsa-miR-4530比有殘端受侵患者多且甲基化水平高，無術(shù)后感染的食管鱗癌hsa-miR-375比有術(shù)后感染患者多且甲基化水平