miR-375在人肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其調(diào)控信號通路的初篩.pdf

1、miRNAs是近來發(fā)現(xiàn)的一組19-24個核苷酸組成的非編碼RNA分子,它們與基因表達(dá)的調(diào)控相關(guān)。這些小分子調(diào)控的基因參與體內(nèi)多種生理進(jìn)程例如細(xì)胞增殖、生長、分化、凋亡及其他等。MicroRNA在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控目的基因的表達(dá),有證據(jù)顯示miRNA在胚胎形成、細(xì)胞分化以及在包括腫瘤在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。microRNA-375(miR-375)是最早發(fā)現(xiàn)的miRNAs家族成員之一,最初被認(rèn)為是胰島特異性 microRNA,近

2、幾年的研究結(jié)果顯示miR-375的表達(dá)異常與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
　　目的:
　　1)探明miR-375在人肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及肝癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染前后其的表達(dá)變化
　　2)miR-375相關(guān)靶基因和調(diào)控信號通路的生物信息學(xué)分析
　　方法:
　　1) miR-375在人肝癌組織芯片和肝癌細(xì)胞株爬片的原位雜交實(shí)驗(yàn)
　　2)實(shí)時定量PCR檢測人肝癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染前后miR-375的表達(dá)
　　3)高通量基因芯

3、片檢測分析4株轉(zhuǎn)染了miR-375 mimic的肝癌細(xì)胞株,初步篩選miR-375調(diào)控的下游靶基因及相關(guān)信號通路
　　結(jié)果:
　　1)肝癌組織芯片的原位雜交結(jié)果顯示,在75例肝癌組織中有41例表達(dá)陽性,34例表達(dá)陰性;在癌旁組織中,有2例表達(dá)陽性,73例表達(dá)陰性。miR-375的表達(dá)在肝癌組織中的表達(dá)明顯高癌旁組織(p<0.005)。
　　2)實(shí)時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示,4株肝癌細(xì)胞株(HepG2、Huh-7、L

4、i-7、SMMC-7721)中Huh-7、Li-7的miR-375的表達(dá)較另外兩株細(xì)胞高,4株肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染后miR-375 mimic后,miR-375的表達(dá)顯著升高;mRNA表達(dá)譜芯片分析結(jié)果顯示,與mimic control轉(zhuǎn)染組比較,miR-375mimic轉(zhuǎn)染的HepG2、Huh-7、Li-7、SMMC-7721細(xì)胞株中分別有2305、424、892和1050個基因表達(dá)上調(diào)(倍數(shù)值≤2.0);分別有2162、536、974、99

5、8個基因表達(dá)下調(diào)(倍數(shù)值≤-2.0);4個轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中的共上調(diào)基因有20個,共下調(diào)基因有17個。
　　3)分別將前述篩選到的20個表達(dá)上調(diào)和17個表達(dá)下調(diào)的基因輸入MAS生物信息學(xué)軟件進(jìn)行分析,對得出的結(jié)果加以整理,4個細(xì)胞株共有的上調(diào)相關(guān)信號通路54條,共有的下調(diào)相關(guān)信號通路下調(diào)48條,包括絲裂原激活蛋白激酶信號通路(MAPKinase Signaling Pathway)、焦點(diǎn)粘連信號通路(Focal adhesion)、胰島

6、素信號通路(Insμlin signaling pathway)、粘附鏈接信號通路(Adherens junction)、Wnt信號通路(Wnt signaling pathway)和細(xì)胞凋亡信號通路(Apoptosis)等。
　　結(jié)論:
　　1)miR-375在其在肝癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織,提示miR-375可能在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。
　　2)miRNA原位雜交方法在組織標(biāo)本上的應(yīng)用,能定性并半定