miR-221在肝細胞癌中的表達和細胞定位研究.pdf

1、miR-221在人肝細胞癌和其他癌癥中都曾被報導(dǎo)上調(diào)表達。它有一個已經(jīng)被證實的靶基因p27Kip1,這個基因下調(diào)會影響HCC的預(yù)后。為了評價在肝細胞癌中miR-221和其靶基因p27KiP1的相關(guān)性,我們利用包含100例肝細胞癌組織標本和癌旁組織標本的組織芯片分別進行了針對miR-221的原位雜交實驗和p27Kip1的免疫組化實驗。原位雜交實驗揭示miR-221僅在胞漿分布,在癌組織和癌旁組織中的陽性率分別為83％和24％,P<0.01

2、,具有顯著差異。且它的高表達與腫瘤大小和轉(zhuǎn)移相關(guān)。免疫組化實驗揭示p27Kip1在肝細胞癌的胞漿和炎癥細胞的胞核中分布,在癌旁組織中則僅在胞漿中分布。p27Kip1在癌組織和癌旁組織中的陽性率分別為28％和81％,P<0.01,具有顯著差異。且它的低表達與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。而p27Kip1蛋白表達和miR-221表達的相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示在肝細胞癌中兩者具有顯著的負相關(guān)關(guān)系。熒光定量RT-PCR實驗進一步證實miR-22l的高表達與p27 K

3、ip1的低表達與肝細胞癌的臨床分期顯著相關(guān),且印證了miR-221的高表達與p27Kip1的低表達與肝細胞癌的轉(zhuǎn)移相關(guān)的結(jié)論。p27Kip1mRNA與miR-221表達的相關(guān)性檢驗結(jié)果亦顯示在肝細胞癌中兩者具有顯著的負相關(guān)關(guān)系。Western Blot實驗結(jié)果清晰地顯示了p27Kip1蛋白水平隨著臨床分期的增加而下降,且其在轉(zhuǎn)移癌組織中的表達量比非轉(zhuǎn)移癌組織中更低。綜上所述,我們認為mig-221在肝細胞癌中具有致癌作用,它是通過下調(diào)細

4、胞周期蛋白激酶的抑制劑的表達水平從而促進癌細胞生長。由于miR-221在肝細胞癌中的陽性率高達83％,且具有致癌作用,因此本研究的結(jié)果可既為開展針對miR-221設(shè)計病理診斷指標,又可為針對miR-221設(shè)計抑制其表達的肝細胞癌治療策略提供理論依據(jù)。 信號通路的異常激活與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān),PTCH(PTCH1)蛋白是Hedgeho信號通路的受體,在該通路的激活過程中擔任著“守門員”的角色,它是整個信號通路的感受器。近年來已

5、有研究證明,Hedgehog信號通路在肝細胞癌(HCC)中處于激活狀態(tài)。為了解Hedgehog信號通路在肝細胞癌(HCC)中的激活頻率以及激活機制,本研究采用半定量RT-PCR方法檢測了57例肝細胞癌(HCC)組織標本,發(fā)現(xiàn)其中38例標本(66％)表達PTCH基因。采用熒光實時定量RT-PCR方法比較了癌組織與癌旁組織中PTCH基因表達差異,發(fā)現(xiàn)在高分化和中分化的癌組織當中,PTCH基因的表達高于癌旁組織,但在低分化的癌組織當中,PTC

6、H基因的表達則低于癌旁組織。對16例肝細胞癌組織切片的免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),PTCH蛋白在9例標本的胞漿中呈表達陽性,陽性率為56.3％。對16例癌旁組織切片的免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),PTCH蛋白僅在1例標本的胞漿中呈表達陽性,陽性率為6.25％,癌旁組織與癌組織中PTCH蛋白表達具有顯著差異,P<0.05。本研究首次進行了PTCH基因在肝細胞癌中的多態(tài)性分析。首先檢測了38例肝細胞癌病例中PTCH基因熱點突變區(qū)域的多態(tài)性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)了兩個之前報導(dǎo)

7、的單核苷酸多態(tài)性位點(SNPs)和一個新發(fā)現(xiàn)的SNP A1056G。以上3個SNP分別位于6號和12號外顯子,均為同義突變。所測序列中并沒有發(fā)現(xiàn)非同義突變。在171例肝細胞癌病人血液標本和162例正常人對照血液標本中,檢測了這3個SNP位點的分布情況.統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示:以上SNP位點均與HCC發(fā)生無顯著相關(guān)性。研究結(jié)果支持前人提出的Hedgehog信號通路在肝細胞癌(HCC)中被頻繁激活的結(jié)論,并認為肝細胞癌中Hedgehog信號通路