Survivin和Livin在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及分析研究.pdf

1、目的：
　　通過改進(jìn)型間斷飲用二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN)誘導(dǎo)大鼠原發(fā)性肝癌模型,觀察大鼠肝臟在不同誘癌階段的病理變化,同時(shí)檢測(cè)Survivin和Livin在大鼠肝臟不同誘癌階段的表達(dá)情況,旨在研究Survivin和Livin在誘導(dǎo)的大鼠肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過程中的變化,探討Survivin和Livin作為肝癌早期診斷的標(biāo)志物的可行性;收集部分臨床人肝癌標(biāo)本及其癌旁組織、肝良性病變組織,檢測(cè)Survi

2、vin和Livin表達(dá)情況,結(jié)合肝細(xì)胞癌的臨床病理參數(shù),進(jìn)一步為臨床提供參考數(shù)據(jù)。同時(shí),與大鼠Survivin和Livin表達(dá)情況進(jìn)行對(duì)比分析,討論該肝癌模型是否較全面的模擬了人肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展。
　　方法：
　　4周齡的雄性近交系wista大鼠80只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(E組,n=68)和對(duì)照組(C組,n=12)。E組動(dòng)物間斷飲用0.01％二乙基亞硝胺(DEN)溶液,C組自由飲用滅菌自來水。實(shí)驗(yàn)中觀察大鼠的一般情況,于實(shí)驗(yàn)

3、第4周、8周、12周、16周、18周分別取E組大鼠12只,C組大鼠2-3只,稱重后麻醉,開腹摘取大鼠肝臟,觀察肝臟大體情況及組織病理學(xué)變化;分別采用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR法檢測(cè)Survivin和Livin在大鼠肝癌形成不同階段的表達(dá)情況,并將兩者在各階段表達(dá)情況進(jìn)行比較分析;用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Survivin和Livin蛋白在40例原發(fā)性肝癌組織及其癌旁組織、15例肝臟良性病變組織(對(duì)照組)的表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)合臨床病理參數(shù)

4、進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.改進(jìn)型間斷飲用DEN誘導(dǎo)的肝癌為肝細(xì)胞癌,大鼠肝臟癌變大致經(jīng)過肝細(xì)胞損傷期、肝硬化期和肝細(xì)胞癌變期三個(gè)階段。至誘癌結(jié)束時(shí)實(shí)驗(yàn)組大鼠自然死亡3只,死亡率4.41%(3/68)。實(shí)驗(yàn)組18周誘癌結(jié)束時(shí)存活的17只大鼠16只形成肝癌,誘癌率94.12%(16/17)。
　　2.Survivin和Livin在正常大鼠肝臟組織不表達(dá),隨著肝癌的發(fā)生,Survivin和Livin陽性表達(dá)率和表

5、達(dá)強(qiáng)度依次升高,各組間陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.5)。至誘癌晚期,可見大量Survivin和Livin陽性表達(dá)細(xì)胞,與對(duì)照組相比,Survivin和Livin在肝硬化期、肝癌變期陽性率均上升(P<0.05/3),與肝硬化組比較,肝癌變組的Survivin和Livin的陽性表達(dá)率亦出現(xiàn)上升(P<0.05/3)。
　　3.Survivin蛋白在臨床肝癌、癌旁組及良性組的陽性率分別為72.50%(29/40)、37.50%(1

6、5/40)、0.00%(0/15),各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.5)。Survivin蛋白在HCC中的表達(dá)與患者性別、年齡、HBsAg、AFP、腫瘤大小無明顯相關(guān)(p﹥0.05),而與病理分級(jí)、門靜脈癌栓有無相關(guān)(p<0.05)。
　　4.Livin蛋白的表達(dá)在臨床肝癌組、癌旁組及良性組的陽性率分別為62.50%(25/40)、35.00%(14/40)、0.00%(0/15),各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.5)。Livin

7、蛋白在HCC中的表達(dá)與患者性別、年齡、HBsAg、AFP、腫瘤大小無明顯相關(guān)(p﹥0.05),而與病理分級(jí)、門靜脈癌栓有無相關(guān)(p<0.05)。
　　5.兩者相關(guān)性:臨床人肝癌組織中Survivin和Livin蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.448,p=0.004)。
　　結(jié)論：
　　1.通過間斷飲用二乙基亞硝胺(DEN)溶液成功建立了大鼠肝細(xì)胞癌模型,該造模方法簡(jiǎn)單,誘癌成功率高,死亡率低。肝癌是在肝硬化的基礎(chǔ)上發(fā)生,

8、此模型是一種較理想的研究人類肝癌的動(dòng)物模型。
　　2.Survivin和Livin參與了肝癌的發(fā)生和發(fā)展,對(duì)于肝癌發(fā)生的各個(gè)階段均有提示作用,可作為肝癌早期預(yù)防和診斷的潛在標(biāo)志物。
　　3.Survivin和Livin蛋白在肝癌組表達(dá)明顯高于良性對(duì)照組,說明其表達(dá)異常和失衡與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),也提示肝癌的進(jìn)展是多因素共同作用的結(jié)果。Survivin和Livin與門脈癌栓的形成及HCC的病理分級(jí)有一定的關(guān)系,提示Sur

9、vivin和Livin可成為判斷肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。
　　4.Survivin和Livin在癌旁組織中表達(dá)與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明陽性表達(dá)的癌旁肝硬化組織具有癌變危險(xiǎn)性,癌旁肝組織可能是一群異常增生的肝細(xì)胞群,其中部分細(xì)胞有可能發(fā)展成為HCC。
　　5.大鼠肝癌的Survivin和livin蛋白表達(dá)情況和人肝癌的表達(dá)情況基本一致,表明DEN誘導(dǎo)的大鼠肝癌模型能較好地從分子生物層面模擬人類肝癌發(fā)生,也進(jìn)一步說明了DEN誘導(dǎo)