Survivin和Apollon在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及分析研究.pdf

1、目的:
　　通過改良型間斷飲用二乙基亞硝胺（diethylnitrosamine,DEN）誘導(dǎo)大鼠原發(fā)性肝癌模型，觀察大鼠肝臟在不同誘癌階段的病理變化，同時檢測Survivin和Apollon在大鼠肝臟不同誘癌階段的表達(dá)情況，旨在研究Survivin和Apollon在誘導(dǎo)的大鼠肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過程中的變化，探討Survivin和Apollon作為肝癌早期診斷標(biāo)志物的可行性；收集部分臨床人肝癌標(biāo)本及其癌旁組織、肝良性病變組織，檢測

2、Survivin和Apollon表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理參數(shù)，探討Survivin和Apollon在人肝癌形成過程中的意義。
　　方法:
　　4周齡的雌雄性近交系wista大鼠共80只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（A組，n=68）和對照組（B組，n=12）。A組動物間斷飲用0.01％二乙基亞硝胺(DEN)溶液，B組自由飲用滅菌自來水。實(shí)驗(yàn)中觀察大鼠的一般情況，于實(shí)驗(yàn)第4周、8周、12周、16周、18周分別取A組大鼠12只，B組大鼠2-3

3、只，稱重后麻醉，開腹摘取大鼠肝臟，觀察肝臟大體情況及組織病理學(xué)變化；分別采用免疫組織化學(xué)法檢測Survivin和Apollon在大鼠肝癌形成不同階段的表達(dá)情況，并將兩者在各階段表達(dá)情況進(jìn)行比較分析；用免疫組織化學(xué)方法檢測Survivin和Apollon蛋白在42例原發(fā)性肝癌組織及其癌旁組織、15例肝臟良性病變組織的表達(dá)情況，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)合臨床病理參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1.改良型間斷飲用DEN成功誘導(dǎo)了大鼠肝癌模

4、型，大鼠肝臟癌變大致經(jīng)過肝細(xì)胞損傷期、肝硬化期和肝細(xì)胞癌變期三個階段。至誘癌結(jié)束時實(shí)驗(yàn)組大鼠自然死亡4只，死亡率5.88%（4/68）。實(shí)驗(yàn)組第18周誘癌結(jié)束時存活的16只大鼠15只形成肝癌，誘癌率93.75%。
　　2.Survivin和Apollon在正常大鼠肝臟組織不表達(dá)，伴隨著肝癌的發(fā)展，Survivin和Apollon蛋白陽性表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度依次升高，各組間陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。與對照組相比，Sur

5、vivin和Apollon在肝硬化期、肝癌變期陽性率均上升（P<0.05/3），肝癌變組與肝硬化組比較，Survivin和Apollon的陽性表達(dá)率亦出現(xiàn)上升(P<0.05/3)。
　　3.Survivin蛋白在臨床肝癌組、癌旁組及良性組的陽性率分別為71.43%（30/42）、40.48%(17/42)、0.00%（0/15），各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。Survivin蛋白在HCC中的表達(dá)與患者性別、年齡、HBsA

6、g、AFP、腫瘤大小無明顯相關(guān)（p>0.05），而與病理分級、門靜脈癌栓相關(guān)（p<0.05）。
　　4.Apollon蛋白在臨床肝癌組、癌旁組及良性組的陽性率分別為66.67%（28/42)、38.09%(16/42)、0.00%（0/15），各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。Apollon蛋白在HCC中的表達(dá)與患者性別、年齡、HBsAg、AFP、腫瘤大小無明顯相關(guān)（p>0.05），而與病理分級、門靜脈癌栓相關(guān)（p<0.05

7、）。
　　5.兩者相關(guān)性：臨床人肝癌組織中Survivin和Apollon蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.409,p=0.005）。
　　結(jié)論:
　　1.本研究通過間斷飲用DEN成功誘導(dǎo)了大鼠肝癌模型，該模型簡單、安全有效，誘癌大鼠具有低死亡率和高誘癌率的特點(diǎn)。
　　2.Survivin和Apollon參與了大鼠肝癌的發(fā)生、發(fā)展，對于大鼠肝癌發(fā)生各個階段均有提示作用，提示其可作為肝癌早期診斷的潛在標(biāo)志物。

8、　　3.Survivin和Apollon在人肝癌組表達(dá)明顯高于良性對照組，說明其表達(dá)異常和失衡與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Survivin和Apollon與門脈癌栓的形成及HCC的病理分級有一定的關(guān)系，提示Survivin和Apollon可作為判斷肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。
　　4.Survivin和Apollon在人肝癌旁組織中表達(dá)與良性對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示陽性表達(dá)的癌旁肝組織具有癌變危險性，癌旁肝組織可能是一群異常過度增生的肝