Hic-5在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全世界第六大常見(jiàn)惡性腫瘤，HCC具有侵襲性強(qiáng)、術(shù)后易復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。研究HCC發(fā)生、進(jìn)展及侵襲的相關(guān)機(jī)制對(duì)降低其發(fā)病率和死亡率有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)HCC及正常肝組織標(biāo)本中過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的克隆-5(hydrogenperoxide-inducible clone-5，Hic-5)及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscleactin，a-SMA)

2、的表達(dá)水平，探討Hic-5及a-SMA與HCC發(fā)生、進(jìn)展的關(guān)系及相關(guān)機(jī)制，同時(shí)分析Hic-5及a-SMA的表達(dá)與HCC各項(xiàng)臨床病理特征之間的相關(guān)性。
　　方法：在獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及所有患者知情同意的情況下，收集手術(shù)切除的HCC組織及相應(yīng)癌旁肝組織標(biāo)本共67例，包括高分化HCC及相應(yīng)癌旁組各22例，中分化HCC及相應(yīng)癌旁組各24例，低分化HCC及相應(yīng)癌旁組各21例;同時(shí)收集15例肝血管瘤患者行手術(shù)切除時(shí)所獲取的血管瘤周?chē)８?/p>

3、組織作為對(duì)照。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohisto-chemistry，IHC)以及免疫印記技術(shù)(western blot，WB)檢測(cè)Hic-5及a-SMA在對(duì)照組肝組織、不同分化程度的HCC組織及相應(yīng)癌旁肝組織中的表達(dá)情況。IHC結(jié)果使用Image pro plus7.0軟件采集Hic-5與a-SMA的光密度值。WB結(jié)果使用凝膠攝像分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描處理，并使用Quantity One5.4軟件測(cè)定各條帶的灰度值。同時(shí)收集各患者

4、的臨床資料，包括住院號(hào)、性別、年齡、術(shù)前影像學(xué)檢查、血常規(guī)檢查、凝血功能檢查、肝腎功能檢查、肝炎病毒標(biāo)志物、血清甲胎蛋白濃度及術(shù)后腫瘤病理資料如腫瘤數(shù)目、大小、分化程度、血管侵犯、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及肝硬化背景等。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理、分析。計(jì)量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）”的形式進(jìn)行描述。使用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法包括t檢驗(yàn)、單因素方差分析、LSD-t檢驗(yàn)以及Kruskal-Wallis H秩和檢驗(yàn)。變量

5、之間相關(guān)性采用直線相關(guān)系數(shù)或Spearman秩相關(guān)進(jìn)行分析。當(dāng)P值＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴IHC結(jié)果顯示:在對(duì)照組肝組織中，Hic-5不表達(dá)或僅較少地表達(dá)于肝小葉的匯管區(qū)周?chē)Ｔ贖CC組織中，Hic-5主要表達(dá)于腫瘤間質(zhì)(HCC周?chē)母窝]、纖維間隔或包膜)，且Hic-5表達(dá)強(qiáng)度（光密度值）隨著HCC分化程度的降低而逐漸增強(qiáng)。Hic-5在HCC組織中的表達(dá)水平高于相應(yīng)癌旁肝組織及對(duì)照組肝組織。不同分化程

6、度HCC組之間或相應(yīng)癌旁組之間，Hic-5表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行兩兩比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。a-SMA在對(duì)照組肝組織中僅少量表達(dá)于肝小葉匯管區(qū)周?chē)?。在HCC組織中，a-SMA主要表達(dá)于腫瘤間質(zhì)，表達(dá)部位與Hic-5基本一致，主要表達(dá)于癌周?chē)母窝]、纖維間隔或包膜。在高分化、中分化及低分化HCC組織中，a-SMA的表達(dá)強(qiáng)度依次增強(qiáng)。在HCC組織中a-SMA的表達(dá)水平高于相應(yīng)癌旁肝組織及對(duì)照組肝組織。不同分化程度HCC組之間或相應(yīng)癌旁組之間，a-

7、SMA表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行兩兩比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Hic-5及a-SMA在伴有肝硬化背景的癌旁肝組織中的表達(dá)水平高于無(wú)肝硬化背景癌旁肝組織及對(duì)照組肝組織。⑵WB結(jié)果顯示:Hic-5蛋白與a-SMA蛋白在HCC組織中的表達(dá)水平（灰度值）均明顯高于相應(yīng)癌旁肝組織及對(duì)照組肝組織。其中，隨著HCC分化強(qiáng)度降低，Hic-5蛋白與a-SMA蛋白的表達(dá)水平亦逐漸升高。不同分化程度HCC組之間或相應(yīng)癌旁組之間，Hic-5蛋白或a-SMA蛋白表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行兩

8、兩比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，在HCC組織及相應(yīng)癌旁肝組織中Hic-5蛋白與a-SMA蛋白的表達(dá)具有相關(guān)性。⑶對(duì)HCC患者臨床及病理特征分析表明Hic-5蛋白及a-SMA蛋白的表達(dá)水平與患者的腫瘤數(shù)目、分化程度、血管侵犯、TNM分期及肝硬化背景有關(guān);與患者性別、年齡、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝功能分級(jí)、肝炎病毒標(biāo)志物及血清甲胎蛋白濃度無(wú)關(guān)。
　　結(jié)論：①與對(duì)照組肝組織及相應(yīng)癌旁肝組織相比，Hic-5、a-SMA高表達(dá)于HCC組織中，提

9、示Hic-5、a-SMA的表達(dá)與HCC的發(fā)生相關(guān)。②在HCC組織中，隨著HCC分化程度的降低，Hic-5、a-SMA表達(dá)強(qiáng)度逐漸升高，提示Hic-5、a-SMA可能參與了HCC的發(fā)生、進(jìn)展。③在各組標(biāo)本中，Hic-5與a-SMA的表達(dá)強(qiáng)度存在正相關(guān)，且IHC顯示兩者主要染色部位基本一致，提示兩者在HCC發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程中可能存在協(xié)同或調(diào)控效應(yīng)，其可能的機(jī)制是Hic-5通過(guò)激活肝星狀細(xì)胞參與HCC的發(fā)生及進(jìn)展。④對(duì)HCC患者臨床病理特征分析