睪丸Sertoli細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠肝移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究擬通過移植肝臟嵌合睪丸Sertoli細(xì)胞的方法,使移植肝臟高表達(dá)FasL,觀察該方法對(duì)大鼠肝移植免疫耐受的誘導(dǎo)作用. 實(shí)驗(yàn)一:睪丸Sertoli細(xì)胞的制備及其對(duì)淋巴細(xì)胞的影響;目的:探討睪丸Sertoli細(xì)胞分離純化的方法及其體外對(duì)淋巴細(xì)胞免疫功能的影響.結(jié)論:睪丸組織采用2.0g/L的膠原酶V消化后,兩次篩網(wǎng)過濾可獲取數(shù)量較多的睪丸Sertoli細(xì)胞,并且可節(jié)省25﹪的膠原酶V,但不影響睪丸Sertoli細(xì)胞的存活率;體外Ser

2、toli細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞的殺傷或抑制作用與Sertoli細(xì)胞數(shù)量和共培養(yǎng)時(shí)間有關(guān).實(shí)驗(yàn)二:嵌合睪丸Sertoli細(xì)胞肝臟模型的建立;目的:建立嵌合Sertoli細(xì)胞肝臟模型,擬將嵌合Sertoli細(xì)胞肝臟作為供肝進(jìn)行移植做準(zhǔn)備.結(jié)論:Sertoli細(xì)胞經(jīng)門靜脈肝內(nèi)注入可在肝臟內(nèi)嵌合,嵌合數(shù)量及肝組織中FasL mRNA相對(duì)表達(dá)含量,與注入數(shù)量有關(guān),當(dāng)注入數(shù)量超過2×10<'7>個(gè),嵌合數(shù)量及FasL mRNA相對(duì)表達(dá)含量不再升高.實(shí)驗(yàn)三:

3、受體肝分步切除的"二袖套"法大鼠原位肝移植模型的建立;(大鼠原位肝移植模型的改進(jìn))目的:改進(jìn)二袖套法大鼠原位肝移植操作方法,使該模型能夠普及應(yīng)用.結(jié)論:受體肝分步切除的"二袖套"法大鼠原位肝移植術(shù),血管吻合單人操作即可快速完成;由于受體血管組織的連續(xù)性存在,簡(jiǎn)化了血管套接時(shí)縫線牽引步驟,保證了血管套接處不易發(fā)生扭曲及成角,縮短了無肝期和手術(shù)時(shí)間,減少了并發(fā)癥發(fā)生,易于掌握,便于推廣.實(shí)驗(yàn)四:嵌合睪丸Sertoli細(xì)胞供肝異體大鼠原位移植

4、誘導(dǎo)免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究;目的:探討嵌合睪丸Sertoli細(xì)胞的肝臟作為供肝進(jìn)行移植,是否可以誘導(dǎo)移植肝臟成為免疫耐受器官.結(jié)論:嵌合Sertoli細(xì)胞供肝移植后,肝組織中FasL含量明顯升高,使移植肝臟產(chǎn)生免疫耐受,延長(zhǎng)移植肝的存活時(shí)間.小結(jié): 1.該研究對(duì)國際上常用的Korbutt分離睪丸Sertoli細(xì)胞的方法進(jìn)行改進(jìn),可快速從睪丸組織獲取數(shù)量較多的活Sertoli細(xì)胞,優(yōu)于Korbutt的方法,而且可節(jié)省25﹪的膠原酶,降低實(shí)驗(yàn)費(fèi)