西瓜花葉病宿州分離物的鑒定.pdf

1、 黃瓜花葉病毒(CMV)是雀麥花葉病毒科黃瓜花葉病毒屬的典型成員，是危害茄科、豆科及葫蘆科等蔬菜作物的最主要的植物病毒之一，能經(jīng)75種蚜蟲(或由種子)傳播，能夠侵染85科365屬1000多種植物。CMV為單鏈、正義RNA病毒，含有RNA1、RNA2、RNA3三條基因組RNA，有些株系還含有衛(wèi)星RNA。RNA1、RAN2編碼與復(fù)制酶有關(guān)的la和2a蛋白，RAN2還編碼一個(gè)與病毒基因表達(dá)有關(guān)的2b蛋白，RNA3編碼運(yùn)動(dòng)蛋白和外殼蛋白。

2、通過Nde Ⅰ/BamHⅠ雙酶切從重組質(zhì)粒pGEM-cp上切出cp全長(zhǎng)基因插入原核表達(dá)載體pET-5a,構(gòu)建重組原核表達(dá)載體pET-cp。再轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5a，以堿法提取質(zhì)粒，經(jīng)NdeⅠ、BamHⅠ雙酶切分析及PCR鑒定，挑取陽(yáng)性克隆再轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)pLysS中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)，SDS-PAGE檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CMV-CP基因得到高效表達(dá)。CP基因表達(dá)產(chǎn)物將用來(lái)制備高效價(jià)抗血清，為檢測(cè)該病毒，同時(shí)也為該病毒診斷檢測(cè)試劑