健骨片促骨形成的實驗研究.pdf

1、骨質疏松癥是以骨量減少、骨組織顯微結構退化為特征，以致骨的脆性增高及骨折危險性增加的一種全身骨病，是嚴重危害絕經后婦女健康的常見病、多發(fā)病，引起了全世界醫(yī)學界的廣泛注意。健骨片由江蘇省中醫(yī)藥研究院骨科集多年治療骨質疏松癥的臨床經驗方精制而成，處方由骨碎補、淫羊藿、懷牛膝等中藥組成，有補腎益精、強筋健骨、活血化瘀之功效。本實驗通過建立大鼠擬絕經后骨質疏松癥模型以及成骨細胞培養(yǎng)，觀察健骨片對絕經后骨質疏松癥的治療作用及作用機理，以期闡明該藥

2、防治絕經后骨質疏松癥的機理。主要研究內容和結果如下：
　　 1健骨片對去卵巢大鼠促進骨形成的防治作用及其作用機理：
　　 將SD雌性大鼠摘除雙側卵巢，常規(guī)喂養(yǎng)3個月制成擬絕經后骨質疏松癥模型，再按17.6、8.8、4.4g生藥/kg·d-1的劑量連續(xù)3個月灌胃給予健骨片（提取液）后，測定受試大鼠的骨密度(BMD)，血清中雌二醇(E2)、堿性磷酸酶(ALP)、骨鈣素(BGP)、Ca2+、胰島素樣生長因子-I(IGF-I)等

3、的含量及骨組織病理形態(tài)學檢查，并與模型對照組和偽手術組進行比較。結果：健骨片各劑量組腰椎骨和股骨的骨密度比模型組有明顯增加，血清中E2水平也明顯增加，并能改善骨小梁形態(tài)，顯著增加骨小梁平均寬度(WAT)與骨小梁面積百分比(TS％)，中低劑量還可明顯降低血清BGP、ALP和Ca2+水平，并增加血清中胰島素樣生長因子-I(IGF-I)的含量。說明健骨片對去卵巢所致大鼠過高的骨轉換具有明顯的抑制作用，并能提高骨再建能力，具有明顯的促進骨形成的

4、作用。
　　 2成骨細胞的培養(yǎng)和鑒定：
　　 本實驗用新生1～2d大鼠顱蓋骨，采用二次酶消化法進行細胞體外培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，對其堿性磷酸酶(ALP)活性及礦化能力進行鑒定。所培養(yǎng)得到的細胞具有體內成骨細胞的生物學行為。本實驗原代培養(yǎng)成骨細胞的方法切實可行，為體外研究提供了一種客觀而有效的實驗手段。
　　 3健骨片原液對成骨細胞作用的研究：
　　 為了觀察健骨片對體外培養(yǎng)新生大鼠顱骨成骨細胞增殖

5、、分化、礦化的的影響，并探討健骨片對TNF-α誘導凋亡的成骨細胞的影響，在成骨細胞細胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的健骨片提取液共同培養(yǎng)，MTT法測定成骨細胞的增殖率和活性，對硝基苯酚法檢測堿性磷酸酶(ALP)活性，茜素紅染色方法觀察礦化結節(jié)的形成。用TNF-α誘導成骨細胞凋亡，采用流式細胞儀觀察健骨片提取液對大鼠成骨細胞凋亡的影響。實驗結果表明，不同濃度的健骨片提取液直接加樣，與成骨細胞共同培養(yǎng)后具有提高培養(yǎng)液中堿性磷酸酶活性的作用，但未發(fā)現