健骨片促骨形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化為特征，以致骨的脆性增高及骨折危險(xiǎn)性增加的一種全身骨病，是嚴(yán)重危害絕經(jīng)后婦女健康的常見病、多發(fā)病，引起了全世界醫(yī)學(xué)界的廣泛注意。健骨片由江蘇省中醫(yī)藥研究院骨科集多年治療骨質(zhì)疏松癥的臨床經(jīng)驗(yàn)方精制而成，處方由骨碎補(bǔ)、淫羊藿、懷牛膝等中藥組成，有補(bǔ)腎益精、強(qiáng)筋健骨、活血化瘀之功效。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠擬絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型以及成骨細(xì)胞培養(yǎng)，觀察健骨片對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的治療作用及作用機(jī)理，以期闡明該藥

2、防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的機(jī)理。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1健骨片對去卵巢大鼠促進(jìn)骨形成的防治作用及其作用機(jī)理：
　　 將SD雌性大鼠摘除雙側(cè)卵巢，常規(guī)喂養(yǎng)3個(gè)月制成擬絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型，再按17.6、8.8、4.4g生藥/kg·d-1的劑量連續(xù)3個(gè)月灌胃給予健骨片（提取液）后，測定受試大鼠的骨密度(BMD)，血清中雌二醇(E2)、堿性磷酸酶(ALP)、骨鈣素(BGP)、Ca2+、胰島素樣生長因子-I(IGF-I)等

3、的含量及骨組織病理形態(tài)學(xué)檢查，并與模型對照組和偽手術(shù)組進(jìn)行比較。結(jié)果：健骨片各劑量組腰椎骨和股骨的骨密度比模型組有明顯增加，血清中E2水平也明顯增加，并能改善骨小梁形態(tài)，顯著增加骨小梁平均寬度(WAT)與骨小梁面積百分比(TS％)，中低劑量還可明顯降低血清BGP、ALP和Ca2+水平，并增加血清中胰島素樣生長因子-I(IGF-I)的含量。說明健骨片對去卵巢所致大鼠過高的骨轉(zhuǎn)換具有明顯的抑制作用，并能提高骨再建能力，具有明顯的促進(jìn)骨形成的

4、作用。
　　 2成骨細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：
　　 本實(shí)驗(yàn)用新生1～2d大鼠顱蓋骨，采用二次酶消化法進(jìn)行細(xì)胞體外培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，對其堿性磷酸酶(ALP)活性及礦化能力進(jìn)行鑒定。所培養(yǎng)得到的細(xì)胞具有體內(nèi)成骨細(xì)胞的生物學(xué)行為。本實(shí)驗(yàn)原代培養(yǎng)成骨細(xì)胞的方法切實(shí)可行，為體外研究提供了一種客觀而有效的實(shí)驗(yàn)手段。
　　 3健骨片原液對成骨細(xì)胞作用的研究：
　　 為了觀察健骨片對體外培養(yǎng)新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞增殖

5、、分化、礦化的的影響，并探討健骨片對TNF-α誘導(dǎo)凋亡的成骨細(xì)胞的影響，在成骨細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的健骨片提取液共同培養(yǎng)，MTT法測定成骨細(xì)胞的增殖率和活性，對硝基苯酚法檢測堿性磷酸酶(ALP)活性，茜素紅染色方法觀察礦化結(jié)節(jié)的形成。用TNF-α誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡，采用流式細(xì)胞儀觀察健骨片提取液對大鼠成骨細(xì)胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度的健骨片提取液直接加樣，與成骨細(xì)胞共同培養(yǎng)后具有提高培養(yǎng)液中堿性磷酸酶活性的作用，但未發(fā)現(xiàn)