補(bǔ)腎健骨中藥對女性運(yùn)動員骨組織保健的機(jī)理研究.pdf

1、目的：通過體外分別培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞、成骨細(xì)胞與共同培養(yǎng)這兩種細(xì)胞，測定與分析杜仲葉提取物對大鼠顆粒細(xì)胞產(chǎn)生雌激素的影響，進(jìn)一步觀察與分析顆粒細(xì)胞所產(chǎn)生的雌激素對成骨細(xì)胞分泌堿性磷酸酶(ALP)的影響，從細(xì)胞與分子水平探討補(bǔ)腎健骨中藥杜仲葉提取物對Ⅰ型骨質(zhì)疏松癥的防治機(jī)理，為保護(hù)女性運(yùn)動員骨組織健康提供營養(yǎng)保健依據(jù)。 方法：細(xì)胞水平研究——加入不同濃度的杜仲葉提取物于培養(yǎng)基中，進(jìn)行大鼠卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)，作用48小時后，采用

2、MTT法測定細(xì)胞增殖率，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked immLmosorbent assay，ELISA)測定各培養(yǎng)液中雌二醇(E<,2>)的生成量。采用膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，取第三代成骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，以顆粒細(xì)胞和成骨細(xì)胞數(shù)目比(2∶1，1∶2)直接混合培養(yǎng)，加入最適濃度的杜仲葉提取物，培養(yǎng)72小時，測定培養(yǎng)液中生成堿性磷酸酶(ALP)的量。分子水平研究——采用RT-PCR技術(shù)，分析測定杜仲葉提取物對

3、成骨細(xì)胞表達(dá)護(hù)骨因子OPG量的影響。 結(jié)果：用不同濃度的杜仲葉提取物分別作用于顆粒細(xì)胞48小時，杜仲葉提取物可增加顆粒細(xì)胞的增殖和雌二醇的生成量，隨著濃度的降低，促進(jìn)作用逐漸減弱，呈劑量依賴性關(guān)系。在10<'-5>g/ml時與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。在成骨細(xì)胞和顆粒細(xì)胞的共同培養(yǎng)72小時后，顆粒細(xì)胞和成骨細(xì)胞數(shù)目比為1∶2組效果明顯，其中共同培養(yǎng)產(chǎn)生的堿性磷酸酶的濃度與相同數(shù)目單獨(dú)培養(yǎng)的成骨細(xì)胞中直接加杜仲葉提取

4、物產(chǎn)生的堿性磷酸酶濃度相比較，有顯著性差異(P<0.05)。杜仲葉提取物可提高成骨細(xì)胞護(hù)骨因子OPG表達(dá)量。 結(jié)論：杜仲葉提取物呈劑量依賴性地增加大鼠顆粒細(xì)胞雌二醇的生成量，同時在顆粒細(xì)胞和成骨細(xì)胞混合培養(yǎng)中，顆粒細(xì)胞產(chǎn)生的雌二醇又可以增加成骨細(xì)胞堿性磷酸酶的分泌，表明杜仲葉提取物除直接促進(jìn)成骨細(xì)胞的生成外，還可通過對性腺的作用來增加體內(nèi)雌激素的分泌促進(jìn)成骨細(xì)胞的生成。因此杜仲葉提取物防治骨質(zhì)疏松癥是多靶點(diǎn)的；在分子水平上，通過