15310.5氮雜胞苷誘導(dǎo)煙草brightyellow2細(xì)胞程序性死亡

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：s13171學(xué)位論文5一氮雜胞苷誘導(dǎo)煙草BrightYelloW一2細(xì)胞程序性死亡指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：孫廣玉教授碩士2013年5月東北林業(yè)大學(xué)牟世南東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專(zhuān)業(yè)：植物營(yíng)養(yǎng)論文答辯日期：2013年6月授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾必櫛景大學(xué)摘要細(xì)胞程序性死亡(programmedceUdea_tll，PCD)，也稱(chēng)為細(xì)胞凋亡，是生物體中的一些細(xì)胞通過(guò)自身的

2、基因調(diào)控的一種主動(dòng)死亡方式。5氮雜胞苷是一種DNA甲基化抑制劑，能摻入DNA，在DNA復(fù)制過(guò)程中與DNA分子結(jié)合，抑制DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyltrallsferase，DNMT)，實(shí)現(xiàn)去甲基化功能，并能重新激活由于過(guò)甲基化而失活的基因，基因組DNA的去甲基化作用使基因組發(fā)生改變，導(dǎo)致生物發(fā)生變異。因此，5一氮雜胞苷(5一Azacytidine)在誘導(dǎo)新物種方面具有重要意義。但是，5一氮雜胞苷抑制DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶，會(huì)影響到

3、細(xì)胞程序化死亡。在國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30771746)的資助下，本文以5氮雜胞苷(5Azacytidine)處理生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期(3～4d)的煙草BY2(brightyellow2)懸浮細(xì)胞，觀察和測(cè)定煙草BY2細(xì)胞的細(xì)胞程序化死亡形態(tài)和生理變化。主要結(jié)果如下：1對(duì)5氮雜胞苷誘導(dǎo)的BY2細(xì)胞進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，植物細(xì)胞的凋亡過(guò)程經(jīng)歷了早期，中期，末期的過(guò)程。早期凋亡細(xì)胞細(xì)胞膜皺縮，與細(xì)胞壁分離形成間隙，類(lèi)似與質(zhì)壁分離狀，細(xì)胞核

4、部分邊緣化。中期細(xì)胞褶皺程度加大，細(xì)胞核凝集成帽形，凝集更為嚴(yán)重。末期細(xì)胞皺縮加大，胞質(zhì)渾濁不清，核凝集成小塊。2提取5azac處理后，死亡煙草BV2細(xì)胞的DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，DNA降解為大約2~4個(gè)核小體的片段，表現(xiàn)出DNALadder現(xiàn)象。進(jìn)行TUNEL檢測(cè)，經(jīng)過(guò)5azac處理的煙草BY2細(xì)胞表達(dá)出陽(yáng)性信號(hào)。以上兩個(gè)結(jié)果都是細(xì)胞程序性死亡的重要生化特征，由此說(shuō)明5azac誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡是細(xì)胞程序性死亡，并具有典型的生化特征