5-氮雜胞苷抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大的作用研究.pdf

1、【研究背景】：
　　據(jù)中國心血管病報(bào)告2011公布的資料顯示，心血管疾病死亡率逐年上升，農(nóng)村居民心血管病死亡率增加速度高于城市居民；中國人口的總死亡率中心血管病死亡占總死亡原因的41％，居各種死因的首位，全國每年350萬人死于心血管病，我國10省市20個(gè)城鄉(xiāng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，35～74歲人群的慢性心衰發(fā)生率為0.9%，且發(fā)病年齡趨于年輕化，對社會(huì)經(jīng)濟(jì)建設(shè)造成巨大影響。高血壓、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、心臟瓣膜疾病等眾多心血管疾病的代償性病理生

2、理表現(xiàn)。而鈣水平紊亂在心肌肥大的發(fā)生機(jī)制中起極為重要的作用。本研究是基于我們相關(guān)前期研究，前期研究結(jié)果表明，心肌細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)控相關(guān)基因的異常表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失衡，繼而激活鈣敏感鈣調(diào)素依賴鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)和鈣調(diào)素依賴蛋白激酶(CaMKs)途徑，導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大的發(fā)生。
　　心肌細(xì)胞肥大時(shí)鈣調(diào)控和鈣信號(hào)途徑相關(guān)基因的調(diào)控機(jī)制目前尚未完全明了，而相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平變化可調(diào)節(jié)基因的異常表達(dá)，導(dǎo)致了疾病發(fā)生。在前期工作基

3、礎(chǔ)上，本研究擬分析甲基化酶抑制劑5-氮雜胞苷在體外誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大中，對細(xì)胞鈣調(diào)控相關(guān)基因SERCA2a、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ表達(dá)水平和相關(guān)基因表達(dá)的異常改變以及細(xì)胞內(nèi)鈣水平的變化，并進(jìn)一步分析鈣信號(hào)途徑相關(guān)基因變化與心肌細(xì)胞肥大的相互關(guān)系，以期探索鈣調(diào)控和鈣信號(hào)途徑相關(guān)基因表達(dá)水平改變、調(diào)控機(jī)理及其在心肌細(xì)胞肥大發(fā)生的作用。該研究將為進(jìn)一步探討心肌細(xì)胞肥大的發(fā)生機(jī)制以及臨床治療奠定基礎(chǔ)，具有較大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。
　　【

4、研究目的】：
　　探討甲基化酶抑制劑5-氮雜胞苷（5-AZA-2’-dC）抑制血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大的作用。
　　【研究方法】：
　　1、原代乳鼠心肌細(xì)胞分離、純化、培養(yǎng)，免疫熒光進(jìn)行原代鑒定。
　　2、建立心肌細(xì)胞肥大模型、干預(yù)藥物濃度選擇及實(shí)驗(yàn)分組：采用不同濃度血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大；不同濃度5-氮雜胞苷處理，cck8檢測細(xì)胞存活率。根據(jù)處理方法，分為5組，分別為對照組、血管緊張素Ⅱ

5、組、5-氮雜胞苷組、血管緊張素Ⅱ與5-氮雜胞苷同時(shí)處理組和5-氮雜胞苷預(yù)處理組。
　　3、測定心肌細(xì)胞ANP mRNA及蛋白表達(dá)、細(xì)胞面積等心肌細(xì)胞肥大的指標(biāo)；
　　4、采用Western blot法檢測各組心肌細(xì)胞ANP、SERCA2a、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ的蛋白質(zhì)表達(dá)的水平；
　　5、鈣離子探針孵育細(xì)胞，激光共聚焦檢測胞內(nèi)鈣變化情況。
　　【研究結(jié)果】：
　　1、血管緊張素Ⅱ體外誘導(dǎo)原代乳鼠心肌細(xì)

6、胞肥大呈濃度依賴性；5-氮雜胞苷對心肌細(xì)胞毒性呈濃度依賴性。
　　2、血管緊張素Ⅱ(10-6 mol/L)處理心肌細(xì)胞48 h，可使心房利鈉肽（ANP）增加，而該作用可被5-氮雜胞苷（10-6 mol/L）抑制。與對照組相比，血管緊張素Ⅱ組心肌的ANP、p-CaMKⅡ蛋白表達(dá)明顯增加；而5-氮雜胞苷同時(shí)加藥組及預(yù)處理組較之血管緊張素Ⅱ組則下降。
　　3、與對照組相比，血管緊張素Ⅱ組心肌的SERCA2a蛋白質(zhì)表達(dá)下降，5-氮雜