血管緊張素Ⅱ聯(lián)合5-氮雜胞苷對小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞向心肌細胞和內(nèi)皮細胞分化的影響.pdf

1、背景與目的:
　　心肌一旦發(fā)生梗死，很難通過心肌再生恢復心肌功能。脂肪間充質(zhì)干細胞(Adipose-derived mesenchymalstemcells，ADMSCs)由于其獨特的優(yōu)勢成為細胞心肌成形術中理想的種子細胞。目前對ADMSCs分化為心肌血管內(nèi)皮細胞的研究較少。本研究利用血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)和5-氮雜胞苷(5-aza)聯(lián)合誘導小鼠ADMSCs向心肌細胞分化的同時，觀察對內(nèi)皮細胞分化的影響，試圖為臨床上尋找更合理的

2、治療缺血性心臟病的方法提供實驗和理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.ADMSCs的體外分離與培養(yǎng):取小鼠腹股溝脂肪，利用差速貼壁法進行分離純化，并進行傳代。觀察細胞的形態(tài)學特點，運用MTT法檢測細胞的增殖情況，運用免疫熒光技術檢測細胞表面抗原CD90，CD105，CD73，CD45的表達。
　　2.實驗分組:將細胞分為4組:(1)對照組:加完全培養(yǎng)基的ADMSCs。(2)5-aza組:加含有5-aza培養(yǎng)基進行誘導24h，

3、然后更換為完全培養(yǎng)基。(3) AngⅡ組:加含有AngⅡ培養(yǎng)基進行誘導24h，然后更換為完全培養(yǎng)基。(4)聯(lián)合誘導組:加入含有5-aza和AngⅡ的培養(yǎng)基誘導24h，然后更換為完全培養(yǎng)基。
　　3.光鏡下觀察經(jīng)誘導后的細胞形態(tài)學特點。運用免疫熒光鑒定CD31，cTnT的表達，運用Western blot檢測cTnT蛋白含量。
　　結果：
　　1.形態(tài)學特點:原代ADMSCs胞核較小，形態(tài)多樣，短梭形，橢圓形、不規(guī)則形，

4、胞體兩端有長、短不一的突出。第3代的細胞體積增大，形態(tài)趨于一致，排列規(guī)則。經(jīng)5-aza誘導后的細胞形態(tài)多樣化，有短桿狀、不規(guī)則形狀，部分包膜不清晰，胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡;經(jīng)AngⅡ及聯(lián)合培養(yǎng)組誘導的細胞，增殖速度較快，細胞形態(tài)均勻，包膜清晰，分泌基質(zhì)較多，呈集團狀聚集，部分細胞形成環(huán)狀分布。
　　2.MTT法結果顯示:ADMSCs生長曲線呈“S”形，第1-3天為細胞生長潛伏期，第4天開始進入對數(shù)生長期，第7天達高峰期。
　　3.免

5、疫熒光檢測結果:第3代ADMSCs表面CD90、CD105、CD73陽性表達，CD45陰性表達。AngⅡ組，聯(lián)合誘導組均能表達CD31。5-aza組、AngⅡ組，聯(lián)合誘導組均能表達cTnT。
　　4.Western blotting結果:5-aza組、AngⅡ組，聯(lián)合誘導組均能表達cTnT，且聯(lián)合誘導組的cTnT蛋白表達量最高。
　　結論：
　　1.5-aza和AngⅡ在體外均能夠誘導ADMSCs分化為心肌細胞，兩者聯(lián)