5-氮胞苷處理大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞與乳鼠心肌細胞共培養(yǎng)時的分化研究.pdf

1、背景: CCMP是采用細胞移植對終末期心力衰竭進行心肌重建治療的方法。胚胎心肌細胞、骨骼肌原細胞、胚胎干細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞和造血干細胞都曾被用于CCMP。但是所有這些CCMP技術(shù)都有一定限制和缺陷，而且主要是在于用于移植的細胞類型。理想的用于CCMP的細胞應(yīng)該具有以下特點：①多能的，擁有在適當?shù)拇碳は路只癁樗杓毎愋偷哪芰?；②增殖能力必須有一定限度；③能夠與宿主心肌形成功能整體。BMSCs就具有以上這些特點，它是多能的，在適

2、當?shù)拇碳は驴梢苑只癁榧〖毎?、軟骨細胞、成骨細胞、脂肪細胞，甚至心肌細胞，非常適合進行CCMP。 5-Aza是一種胞嘧啶核苷類似物，離體試驗表明BMSCs在5-Aza的處理下可以分化為心肌細胞。目前在BMSCs移植治療心肌損傷的在體動物研究中，一部分研究者在移植前先用5-Aza對使用的：BMSCs進行處理，以促進BMSCs向心肌細胞的分化，另一部分研究者則不用5-Aza對BMSCs進行處理；5-Aza可用作單次處理，也有雙次處理，

3、是否用5-Aza處理以及處理次數(shù)對于BMSCs向心肌細胞分化的影響，目前尚無相關(guān)的文獻報告。Fukuhara等人的研究表明，小鼠BMSCs與乳鼠心肌細胞共培養(yǎng)能夠模擬心臟細胞移植時的環(huán)境。本研究的目的在于利用與乳鼠心肌細胞共培養(yǎng)模型，擬探討用5-Aza處理能否促進BMSCs向心肌細胞的分化以及處理次數(shù)對分化的影響。 目的:探討在大鼠BMSCs與乳鼠心肌細胞共培養(yǎng)模型中，用5-Aza處理能否促進BMSCs向心肌細胞的分化以及處理次

4、數(shù)對分化的影響。 方法: 1．分離和純化大鼠BMSCs，分組并用5-Aza處理BMSCs。 2．用流式細胞儀鑒定BMSCs(CD<,29>、CD<,34>、CD<,44>)。 3．分離和收集乳鼠心肌細胞。 4．BMSCs的標記和與乳鼠心肌細胞共培養(yǎng)。 5．免疫熒光法鑒定BMSCs心肌細胞標志物MHC、cTnI。 6．半定量RT-PCR檢測各組BMSCs的MHC mRNA、cTn

5、I mRNA表達。 結(jié)果: 1．BMSCs生長、分化及鑒定 各組的BMSCs形態(tài)基本相同，用流式細胞儀鑒定，CD<,29>、CD<,44>為陽性，而CD<,34>陰性。 2．免疫熒光化學(xué)結(jié)果組2 BMSCs心肌細胞標志物MHC、cTnI陽性率與組1比較無明顯增加；組3與組1比較MHC、cTnI陽性率明顯增加,差異有顯著意義;組4與組1比較,MHC、cTnI陽性率也明顯增加,差異有非常顯著意義,而且組4與組3比較