5-氮胞苷處理大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與乳鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的分化研究.pdf

1、背景: CCMP是采用細(xì)胞移植對(duì)終末期心力衰竭進(jìn)行心肌重建治療的方法。胚胎心肌細(xì)胞、骨骼肌原細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和造血干細(xì)胞都曾被用于CCMP。但是所有這些CCMP技術(shù)都有一定限制和缺陷，而且主要是在于用于移植的細(xì)胞類型。理想的用于CCMP的細(xì)胞應(yīng)該具有以下特點(diǎn)：①多能的，擁有在適當(dāng)?shù)拇碳は路只癁樗杓?xì)胞類型的能力；②增殖能力必須有一定限度；③能夠與宿主心肌形成功能整體。BMSCs就具有以上這些特點(diǎn)，它是多能的，在適

2、當(dāng)?shù)拇碳は驴梢苑只癁榧〖?xì)胞、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞，甚至心肌細(xì)胞，非常適合進(jìn)行CCMP。 5-Aza是一種胞嘧啶核苷類似物，離體試驗(yàn)表明BMSCs在5-Aza的處理下可以分化為心肌細(xì)胞。目前在BMSCs移植治療心肌損傷的在體動(dòng)物研究中，一部分研究者在移植前先用5-Aza對(duì)使用的：BMSCs進(jìn)行處理，以促進(jìn)BMSCs向心肌細(xì)胞的分化，另一部分研究者則不用5-Aza對(duì)BMSCs進(jìn)行處理；5-Aza可用作單次處理，也有雙次處理，

3、是否用5-Aza處理以及處理次數(shù)對(duì)于BMSCs向心肌細(xì)胞分化的影響，目前尚無相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)告。Fukuhara等人的研究表明，小鼠BMSCs與乳鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng)能夠模擬心臟細(xì)胞移植時(shí)的環(huán)境。本研究的目的在于利用與乳鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng)模型，擬探討用5-Aza處理能否促進(jìn)BMSCs向心肌細(xì)胞的分化以及處理次數(shù)對(duì)分化的影響。 目的:探討在大鼠BMSCs與乳鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng)模型中，用5-Aza處理能否促進(jìn)BMSCs向心肌細(xì)胞的分化以及處理次

4、數(shù)對(duì)分化的影響。 方法: 1．分離和純化大鼠BMSCs，分組并用5-Aza處理BMSCs。 2．用流式細(xì)胞儀鑒定BMSCs(CD<,29>、CD<,34>、CD<,44>)。 3．分離和收集乳鼠心肌細(xì)胞。 4．BMSCs的標(biāo)記和與乳鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng)。 5．免疫熒光法鑒定BMSCs心肌細(xì)胞標(biāo)志物MHC、cTnI。 6．半定量RT-PCR檢測(cè)各組BMSCs的MHC mRNA、cTn

5、I mRNA表達(dá)。 結(jié)果: 1．BMSCs生長(zhǎng)、分化及鑒定 各組的BMSCs形態(tài)基本相同，用流式細(xì)胞儀鑒定，CD<,29>、CD<,44>為陽性，而CD<,34>陰性。 2．免疫熒光化學(xué)結(jié)果組2 BMSCs心肌細(xì)胞標(biāo)志物MHC、cTnI陽性率與組1比較無明顯增加；組3與組1比較MHC、cTnI陽性率明顯增加,差異有顯著意義;組4與組1比較,MHC、cTnI陽性率也明顯增加,差異有非常顯著意義,而且組4與組3比較