16615.大腸桿菌o157h7富集及快速檢測方法的研究

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌態(tài)堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名(手寫)：氟寄靶簽字日期：刃『2年多月7日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完

2、全了解南昌大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權南昌大學可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編本學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所和中國學術期刊(光盤版)電子雜志社將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數據庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數據庫》中全文發(fā)表，并通過網絡向社會公眾提供信息服務。(

3、保密的學位論文在解密后適用本授權書)學位論文作者簽名(手寫)：簽字日期：如臟年／月7能者不＼h’、，o導師簽名(手寫)：日簽字日期：勿f／2年石月∥日摘要摘要大腸桿菌0157：H7是腸出血性大腸桿菌(EHEC)的主要血清型，能夠導致腹瀉、出血性結腸炎、溶血性尿毒綜合癥和血栓形成的血小板減少性紫癜等病癥，該菌的流行暴發(fā)大多與食用被該菌污染的食物有關，因此建立快速、簡單、靈敏度高和特異性強的檢測方法對于該菌的防控具有重要意義。本文建立了免疫

4、磁珠分離富集和膠體金免疫層析試紙條相結合的方法，用于大腸桿菌0157：H7的快速檢測。本研究以03％甲醛滅活的大腸桿菌0157：H7菌體作為免疫原制備了兩組兔多抗，間接ELISA測得純化后的效價分別為1／64x105和1／128x106；以酸洗脫法提取的鞭毛蛋白免疫Balb／c小鼠制備單抗，獲得了3株穩(wěn)定分泌特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株(10C5H3B6、8C2和881C2一B1)，其制備的腹水純化后效價分別為1／64x106、1／1

5、6x104和1／128x105，Westernblots結果顯示單抗10C5H3B6針對的抗原表位為菌體脂多糖(LPS)，單抗8C2針對的抗原表位為鞭毛蛋白。本研究采用EDC／NHSS化學偶聯法制備免疫磁珠，對免疫磁珠進行了表征，按實際捕獲效果來確定免疫磁珠制備工藝，對免疫磁珠添加量、孵育時間、分離時間等進行了優(yōu)化，評價了其特異性及在食品基質樣品中的捕獲效果。結果顯示：單抗10C5H3B6免疫磁珠捕獲率為999％，偶聯時抗體加入量為50

6、gg／mg；經試驗優(yōu)化，確定在1mL體系中免疫磁珠加入量為005mg，室溫孵育時間為30min，磁分離時間為3min。該免疫磁珠特異性良好，在牛肉和牛奶基質中的捕獲率分別為944％和998％，而商品化的Dynabeadsanti0157免疫磁珠在牛肉餡和牛奶基質中的捕獲率分別為728％和958％。采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，膠體金標記單抗10C5H3B6后噴于金標墊上，NC膜上依次噴2號兔多抗和驢抗鼠多抗作為檢測線和質控線，研制