17685.蘇云金芽胞桿菌芽胞期調(diào)控因子和cry蛋白表達(dá)關(guān)系的研究_第1頁
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1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文蘇云金芽胞桿菌芽胞期調(diào)控因子和Cry蛋白表達(dá)關(guān)系的研究姓名：王新梅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物學(xué)；遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：李杰20120620東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文TheRelationshipofRegulatoryFactorsofSporesandCryProteinExpressioninBacillusthuringiensisAbstractThemostdistinctivefeaturesofthe

2、bacteriaBacillusthuringiensis(BOiSthattllevareGrampositive，BacilliwhichproducescrystaltoxinsduringsporeformationandvegetativegrowthThecrystaltoxinshavebeenfoundtobeactiveagainstagronomicalinsectspestsintheorderssuchasLep

3、idopteraColeoptera，DipteraHomopteraHymenopteraOrthopteraandothernoninsectpestsThecrystaliscomposedofinsecticidalcrystalproteinswhichisencodedbycryorcytgenesThoughtherehavebeenindepthresearchonthemechanismofregulationofex

4、pressionofdifferenttypesofcrygene，theactivityofdifferentpromoterhasnotbeenreposedThisstudycomparestheactivitiesofthepromotersofcrylAccry3Aacry4A，crySEagenesinthemothercellregulatoryfactorsSpolIIDmutantsandconductedapreli

5、minaryanalysisofthesRNAofsporeformationgeneTheenzymeassayof13galactosidaseactivityshowedthatthedeletionofspolIIDhadnoeffectontranscriptionalactivityofPcrylAeandPcry8EThetranscriptionalactivityofPcry3AinliDASpollIDWasfoun

6、dtobeslightlyhigherthanthatinwildtypeliD73ThetranscriptionalactivityofPcry4AinliDASpolIIDwasobservedtobelowercomparedtoHD73TheactivitiesofthefourpromoterswerefoundtobePcry8EPcrylAPcry4APcry3AinbothHD73andliDASpollIDstrai

7、nswhichshowsadecreasingordertrend660nmProteinAssayKitwasusedinassayingthetotalproteinsinthesupernatantsofliDAspollIDandliD。ASpolIID，andthesameamountofproteinsamplesweretakenforSDSPAGEelectrophoresisTheresultsshowedthatth

8、ereWasthesameamountoftotalproteininHDAspolIIDandHDASpolIIDstrainsTheCrylAcproteinproductiondirectedbyPcrylAcWasasmuchasPcrySEinliDASpolIIDandhigherthanthatofPcry4AandPcry3AinaccordancewiththebioassayresultTheanalysisofth

9、eactivitiesoftheexpressedCrylAcagainstdiamondbackmothwereconsistentwiththelevelofproteinproductiondirectedbydifferentpromotersInordertoanalyzetheimpactofwildtypepromoterexpressionofcrylAcandtheexpressionbydifferentcrypro

10、moters，aspolIIDgenemutant(HDASpolIID)withdeletionofthecrylAcharboringnativeplasmidwasconstructedbasedonHD—ASpolIIDstrainInHI)AspolIIDbacterialstrains，withthesameamountofprotein，theCrylAcproteinproductiondirectedbyPcrylAc

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