蘇云金芽胞桿菌sigL基因功能的研究.pdf

1、本文圍繞蘇云金芽胞桿菌中的sigL基因的功能進行了一系列的研究，主要內(nèi)容包括： 克隆了BtHD-73菌株的sigL基因，通過核苷酸序列同源性比對分析發(fā)現(xiàn)，在蠟樣芽胞桿菌群(Bacilluscereusgroup)中具有較高的相似性，而與枯草芽胞桿菌的相似性較低，為43％。氨基酸序列分析表明，sigL基因?qū)儆讦?4家族。 應用同源重組的方法構(gòu)建了BtHD-73菌株的sigL基因插入失活突變菌株，并構(gòu)建了相應的互補菌株，對s

2、igL基因的功能進行了研究。在營養(yǎng)成分豐富的培養(yǎng)基中，sigL突變體的生長速率明顯比出發(fā)菌株低，說明sigL基因的缺失影響了菌體對培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分的利用，sigL基因在BtHD-73菌株中是重要的調(diào)控代謝途徑的σ因子。比較了出發(fā)菌株與sigL突變菌株在不同氮源培養(yǎng)基中的生長情況，差異顯著性分析表明，sigL基因的缺失導致菌體不能利用精氨酸、脯氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸為唯一的氮源。SDS-PAGE和芽胞計

3、數(shù)分析表明，sigL基因的缺失推遲了HD-73菌株殺蟲晶體蛋白產(chǎn)生的時間，降低了芽胞的產(chǎn)量。 在已公布的Bt97-27庫斯塔克亞種全基因組序列中找到了5個依賴于σL的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(AcoR、BkdR、Bt104、LevR、Reg)，在HD-73菌株中構(gòu)建了這些轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的啟動子與lacZ融合表達質(zhì)粒，通過β-半乳糖苷酶活性分析表明，這5個基因的啟動子在sigL突變體中的活性比在BtHD-73菌株中的活性低；蛋白結(jié)構(gòu)域分析表明，

4、這5個轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的蛋白結(jié)構(gòu)域具有依賴于σ54的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的結(jié)構(gòu)特點；序列比對分析表明，這些轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子所在的操縱子的啟動子序列具有受sigL調(diào)控的-12/-24區(qū)的特點，以上的結(jié)果說明Bt中的這些轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子是依賴于σL的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。 研究了sigL基因?qū)Ζ?氨基丁酸(GABA)代謝途徑的調(diào)控，構(gòu)建了GABA代謝途徑中g(shù)abT基因(編碼γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶)的啟動子與lacZ融合表達質(zhì)粒，通過β-半乳糖苷酶活性分析表明，ga