25227.益生菌lactobacilluscaseizhang高密度培養(yǎng)技術(shù)及發(fā)酵過(guò)程中關(guān)鍵酶基因表達(dá)變化的研究

1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文益生菌LactobacilluscaseiZhang高密度培養(yǎng)技術(shù)及發(fā)酵過(guò)程中關(guān)鍵酶基因表達(dá)變化的研究姓名：李妍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：畜產(chǎn)品安全生產(chǎn)指導(dǎo)教師：張和平20081201200L(有效工作容積150L)逐級(jí)放大中試生產(chǎn)工藝驗(yàn)證。200L規(guī)模發(fā)酵罐發(fā)酵菌體密度可達(dá)2910加CFU／mL，與小試水平無(wú)差異。證明本研究所得到的Lcaseizhang高密度培養(yǎng)技術(shù)切實(shí)可行，能夠?qū)崿F(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。初步探討發(fā)酵后

2、菌體的離心和冷凍干燥過(guò)程對(duì)菌體的影響，雖然發(fā)酵液經(jīng)離心收集菌體并冷凍干燥可得到平均活茵數(shù)265x1011CFU／g的菌粉，能夠滿(mǎn)足益生菌制劑和發(fā)酵劑對(duì)高活菌數(shù)的要求，但凍干前后活菌得率僅4997％。有必要針對(duì)LcaseiZhang的凍干保護(hù)劑和凍干工藝進(jìn)一步優(yōu)化，以提高菌體存活率得到更高菌體濃度的益生菌粉。研究了不同培養(yǎng)條件下，gapd、gyrB、Idh、16srRNA和recA5個(gè)常用管家基因的表達(dá)情況，并應(yīng)用GeNorm軟件分析了管

3、家基因的穩(wěn)定性，結(jié)果表明5個(gè)管家基因在本試驗(yàn)所研究條件下表現(xiàn)都比較穩(wěn)定，尤以gapd和gyrB最穩(wěn)定，可以作為實(shí)時(shí)定量PCR的內(nèi)參。采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)研究了pH、乳酸濃度、通氣條件和生長(zhǎng)階段的變化對(duì)厶caseiZhang一些關(guān)鍵酶基因(涉及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、糖酵解和分子伴侶蛋白等方面的13個(gè)基因)表達(dá)變化的影響，結(jié)果表明不同培養(yǎng)條件對(duì)不同基因表達(dá)的影響程度不一，從轉(zhuǎn)錄水平描述了各種不同的發(fā)酵條件對(duì)菌體生長(zhǎng)代謝的影響，為后續(xù)深入研究該菌