25394.家蠶赤蟻突變的分子定位及淡赤蟻(ch39;p)的分子基礎(chǔ)初探

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶赤蟻突變的分子定位及淡赤蟻（ch）的分子基礎(chǔ)初探姓名：黃永燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：代方銀魯成20100501西南大學(xué)碩學(xué)位論文篩選，找劍了10對(duì)在兩個(gè)親本間表現(xiàn)多態(tài)性的引物，再用這10對(duì)引物對(duì)2個(gè)親本、Fl代和連鎖分析組合BClF群體的20個(gè)個(gè)體(10個(gè)正常個(gè)體和lO個(gè)表現(xiàn)赤蟻的個(gè)體)，共23個(gè)個(gè)體基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和PAGE電泳檢測(cè)，篩選到5對(duì)與標(biāo)記基因血連鎖的SSR標(biāo)記：S0903、

2、S0904、S0907、S0908和S0910。用這5對(duì)SSR標(biāo)記對(duì)億突變基因的定位分析組合BClM群體的100個(gè)個(gè)體基因組DNA進(jìn)行SSRPCR分析，經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析，利用作圖軟件得到突變基因和與它們連鎖的5個(gè)SSR標(biāo)記的連鎖圖。連鎖SSR標(biāo)記與突變基因腸在連鎖圖上的順序依次為：S0907、Ia、S0904、S0903、S0908、S0910。連鎖圖的遺傳距離是444cM，距離腸最近的SSR標(biāo)記是S0904，圖距為10eM。(3)隱

3、性赤蟻如基因的分子定位利用屬于家蠶第13連鎖群的共11對(duì)SSR引物在定位系統(tǒng)親本Dazaoch和近交系C108間篩選得到了7對(duì)有多態(tài)性的引物。用兩個(gè)親本、F1代和BClF代共23個(gè)個(gè)體基因組進(jìn)行了連鎖驗(yàn)證，找到了5對(duì)與標(biāo)記基因連鎖的SSR標(biāo)記：S1308、S1309、S131l、S1312和S2213。用這5對(duì)標(biāo)記對(duì)幽的定位分析組合BClM群體的166個(gè)個(gè)體基因組DNA進(jìn)行SSRPCR分析，經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析，將砌基因定位于標(biāo)記S130

4、9和S2213之間，距離如最近的標(biāo)記是S1309，圖距為73eM；eh距離標(biāo)記S2213遺傳距離為91eM。(4)淡赤蟻(∥)的分子基礎(chǔ)初探在已知赤蟻突變嘲與yellow基因有關(guān)的情況下，根據(jù)NCBI上yellow基因的CDS序列跨ORF設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增等位基因淡赤蟻(ohp)eDNA中yellow基因，得到兩種剪接方式的表達(dá)?？寺〔y(cè)序，chptypel屬于插入型突變，在第3外顯子前插入不規(guī)律的一段序列，由TAA引起翻譯提前終止。c礦ty

5、pe2屬于缺失型突變，由第2外顯子和第4外顯子直接相連，缺失整個(gè)第3外顯子共189bp(終止密碼子與野生型相同)。其中，typel為淡赤蟻所特有的剪接方式，通過(guò)對(duì)其編碼氨基酸的序列、糖基化位點(diǎn)分析、功能域預(yù)測(cè)及高級(jí)結(jié)構(gòu)等分析，初步推測(cè)其為導(dǎo)致淡赤蟻表型的分子基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，yellow基因從家蠶胚胎期的12h就開(kāi)始表達(dá)。yellow基因在家蠶的頭部中高量表達(dá)，此處為淡赤蟻與正常大造表型差異最明顯的地方，說(shuō)明yellow基因參與了家蠶