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1、上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文柔嫩艾美耳球蟲(chóng)抗藥株的基因重組法選育及耐藥性相關(guān)基因研究姓名:郭濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師:黃兵20100301上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要根據(jù)差異表達(dá)基因的ESTs序列,利用RACE技術(shù),擴(kuò)增獲得了3個(gè)與耐藥性相關(guān)新基因(M20、E2、H3)的全長(zhǎng)cDNA,其中耐藥株表達(dá)上調(diào)基因2個(gè),下調(diào)基因1個(gè)。利用生物信息學(xué)分析軟件對(duì)新基因編碼蛋白的理化性質(zhì)、信號(hào)肽、跨膜結(jié)構(gòu)、疏水性、保守功能域及同源性等進(jìn)行
2、了分析預(yù)測(cè)。M20編碼的蛋白分子量約為19kDa,無(wú)跨膜結(jié)構(gòu),無(wú)信號(hào)肽,與剛地弓形蟲(chóng)(ToxoplasmagondiiGTI)的胰島素降解酶在31477位氨基酸間具有45%的同源性;該基因在耐藥株中表達(dá)上調(diào),推測(cè)其通過(guò)降解胰島素而阻礙胞外陽(yáng)離子進(jìn)入胞內(nèi),而使藥物失效。E2編碼的蛋白分子量約32kDa,具有1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)、1個(gè)信號(hào)肽和1個(gè)DUF477超家族蛋白保守功能域,與Toxoplasmagondii種保守假定蛋白在31285位氨基酸間
3、具有36%的同源性;該基因在耐藥株中表達(dá)下調(diào),功能有待進(jìn)一步研究。H3編碼蛋白分子量約36kDa,無(wú)跨膜結(jié)構(gòu),具有1個(gè)信號(hào)肽和1個(gè)層粘連蛋白G超家族保守功能域,與Toxoplasmagondii一種保守假定蛋白在10340位氨基酸間具有65%的同源性;該基因在耐藥株中表達(dá)上調(diào),推測(cè)其促進(jìn)蟲(chóng)體進(jìn)入宿主細(xì)胞,減少高濃度藥物對(duì)蟲(chóng)體的傷害,而使藥物失效。綜上,本文所采用的基因重組法為球蟲(chóng)表型的遺傳學(xué)研究提供了重要思路,而對(duì)耐藥性相關(guān)基因的克隆研
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