26289.基于高分枝聚合物材料富集糖肽新方法的研究

1、安徽醫(yī)科大學碩士學位論文1基于高分枝聚合物材料富集糖肽新方法的研究中文摘要蛋白質糖基化作為一種最常見的翻譯后修飾[1]。它不僅在蛋白質的穩(wěn)定性、溶解性、折疊和功能執(zhí)行方面起著關鍵的作用，而且參與細胞內蛋白質的運輸、定位和分子識別[23]。此外，異常糖基化也已經被證明和癌癥等疾病相關[45]，許多糖蛋白可以作為臨床生物標志物和治療靶標[6]。因此，糖蛋白和糖肽的分離、發(fā)現(xiàn)和鑒定變得越來越重要，它可以幫助我們更好地理解生物過程，尋找潛在的診

2、斷標志物和治療靶點。依靠生物質譜對糖肽規(guī)模化定性與定量分析，已成為當前蛋白質翻譯后修飾研究的一個重要研究方向。由于糖肽僅占所有酶解后肽段的小部分（2%~5%）[7]，其質譜響應很容易被高豐度非糖肽抑制。另外，糖鏈的微觀不均一性進一步降低了糖肽的相對量而使得它們難以被質譜檢測。因此，對于糖肽的特異性富集至關重要。凝集素[8]和抗體[9]是最重要的兩種親和富集方法，但具有穩(wěn)定性差，價格昂貴的缺點。分子排阻[10]、親水色譜[1112]、硼酸

3、富集[1314]也都廣泛應用于糖肽的富集。但是，各種富集手段都存在一定的缺點，這些都使得糖蛋白組學的研究進展相對于磷酸化、泛素化、乙?；绕渌g后修飾，更為落后。近年來，酰肼固相提取[1516]法作為傳統(tǒng)的富集N糖蛋白糖肽的富集方法也備受關注。但是它也存在一些不可避免的缺點：樣品損耗大，步驟繁瑣。此外，最常用的商業(yè)化酰肼樹脂不僅價格高，而且在溶液中結合糖蛋白糖肽能力有限[17]。因此，目前依靠酰肼富集N糖蛋白糖肽的方法還有待完善。高分

4、枝聚合物由于其獨特的結構特性，如準確的大小，內部空腔，和各種同等功效功能基團，顯示的性質出與相應線型分子完全不同[18]，如黏度低、溶解性好等，這些特性使其具有廣泛的應用前景，近年來也成聚合物領域的研究熱點[1920]，已有很多將其應用到蛋白質組學研究中的例子[2123]。論文的第一章綜述了糖蛋白的研究意義和研究內容。第二章為探索性實驗，探索了商品化樹枝狀聚合物PAMAM是否可以應用于糖肽富集。研究提出了一種安徽醫(yī)科大學碩士學位論文3H

5、ighBranchedPolymerfHighlyEfficientEnrichmentofGlycopeptideAbstractAsoneofthemostcommonposttranslationalmodification[1]proteinglycosylationnotonlyplayskeyrolesinthestabilitysolubilityfoldingfunctionexecutionofproteinsbuta

6、lsoisinvolvedintransptationlocalizationrecognitionofproteininvivo[23].Furthermeithasprovedthatabnmalglycosylationareassociatedwithdiseasescancer[45]manyglycoproteinsarealsoclinicalbiomarkerstherapeutictargets[6].Thusthes

7、eparationdetectionidentificationofglycoproteinsglycopeptidesareofgreatimptanceitcanhelpustounderstbiologicalprocessesbetteridentifymepotentialdiagnosticmarkerstherapeutictargets.Currentlyglycopeptidequalitativequantitati

8、vebasedonbiologicalspectrometrymassanalysishasbecomeanimptantfieldofresearchesonproteinposttranslationalmodifications.Sinceglycopeptidesusuallyexistinverylowabundance(2%~5%)inproteindigestion[7]theyareeasilyinterferedbyt

9、hehighlyabundanznonglycopeptideduringmassspectrometricanalysis.Inadditionthemicroheterogeneityofcarbohydratechainmayfurtherreducetherelativeamountofglycopeptidesmakesthemratherdifficulttobedetected.Therefetheiveenrichmen

10、tofglycoproteinsisofgreatimptance.Lectins[8]antibodies[9]aretwomajmoleculartoolsfiveenrichmentofglycoproteinglycopeptidesbutthesebiomoleculesaregenerallyexpensivehavepostability.Molecularexclusion[10]hyhilicchromatograph

11、y[1112]bicacidconcentration[1314]arealsowidelyusedintheenrichmentofglycopeptides.Howeverthesemethodsareallassociatedwithapparentdisadvantageswhichmakingprogressesinglycosylationresearchisrelativelydelayedthanotherposttra