皖北黃牛種群隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA研究.pdf

1、選取10條隨機(jī)引物對(duì)皖北黃牛進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA(RAPD)分析,并根據(jù)帶紋相似率作了親緣關(guān)系聚類(lèi).實(shí)驗(yàn)共采集31頭皖北黃牛的耳組織樣,采用高鹽與氯仿結(jié)合的快速抽提法提取基因組DNA,結(jié)果從0.02~0.05g的組織樣中提取量多數(shù)達(dá)到150~300μg.建立了RAPD-PCR的反應(yīng)體系,10條RAPD引物篩選到4條隨機(jī)引物可以得到穩(wěn)定的擴(kuò)增產(chǎn)物,其中僅有1條引物的擴(kuò)增產(chǎn)物表現(xiàn)為單態(tài),3條引物的擴(kuò)增產(chǎn)物具有多態(tài)性.利用能夠產(chǎn)生多態(tài)性的引

2、物對(duì)樣本群體進(jìn)行RAPD和類(lèi)平均聚類(lèi)分析,共得到清晰的帶紋382條、擴(kuò)增片段有19種,平均每個(gè)引物每一個(gè)體擴(kuò)增帶紋4.04條,所獲得的標(biāo)記數(shù)為4~7個(gè),標(biāo)記分子大小范圍為0.25~2.00kb,各條帶出現(xiàn)的比例為0.1613~1.000;其中,引物S431、S425和S40分別得到9、6和4種擴(kuò)增帶紋以及5、4和3種多態(tài)標(biāo)記帶,共有200條為多態(tài)帶紋,多態(tài)性擴(kuò)增片段的百分比為52.36％.據(jù)此計(jì)算了3個(gè)多態(tài)性引物對(duì)于每?jī)蓚€(gè)個(gè)體之間的帶紋

3、相似率、平均帶紋相似率(0.69、0.67和0.87,總平均0.75)、帶紋的平均等位基因頻率(0.47、0.50和0.74,總平均0.57)、平均帶紋雜合度(0.68、0.63和0.36,總平均為0.55)及遺傳多樣性指數(shù)(0.9875、0.6427和0.1925);根據(jù)31個(gè)個(gè)體間的平均帶紋相似率而作的聚類(lèi)分析顯示,兩兩個(gè)體間的遺傳距離范圍為1.97~14.5.結(jié)果表明:1.在秦川牛、云南和貴州的黃牛品種中10條多態(tài)性隨機(jī)引物已被文

4、獻(xiàn)證明是可靠的,在皖北黃牛的RAPD-PCR中卻只有4條引物能夠完全擴(kuò)增出產(chǎn)物,其中引物S1043擴(kuò)增產(chǎn)物屬于單態(tài),說(shuō)明皖北黃牛與這三個(gè)品種之間存在較大的遺傳差異.2.從BSR、q、H和Shannon遺傳多樣性指數(shù)上來(lái)看,在3條多態(tài)性引物中S431反映的遺傳變異信息最大,產(chǎn)物的帶紋最多,多態(tài)性較好;S40反映的遺傳變異信息最小.BSR、q、H及H<,0>的平均值分別為0.75、0.57、0.55和0.61,說(shuō)明RAPD產(chǎn)物在整體上反映樣