斑點(diǎn)免疫金滲濾法快速檢測(cè)磺胺甲噁唑殘留.pdf

1、該研究制備了三種磺胺藥的多克隆抗體,建立了快速檢測(cè)磺胺甲噁唑的斑點(diǎn)免疫金滲濾法,為該技術(shù)在畜產(chǎn)品中磺胺藥殘留檢測(cè)上的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).研究結(jié)果如下:分別以HAS、RSA為載體用重氮化法合成人工免疫原SMZ-HSA、SN-HSA、SDM-HSA及SMZ-RSA,以O(shè)VA為載體合成相應(yīng)的包被原;經(jīng)紫外掃描和高效液相色譜分析,表明合成成功.用合成的SMZ-HSA免疫原免疫鼠和兔,SN-HSA、SMZ-RSA及SDM-HSA三種免疫原免疫兔,所得

2、抗血清經(jīng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測(cè)定其效價(jià)分別為1:32、1:16、1:16、1:8、1:16;ELISA法測(cè)定其效價(jià)依次為1:512000、1:256000、1:256000、1:64000、1:320000.經(jīng)ELISA法檢測(cè)四種兔多抗與OVA均無(wú)交叉反應(yīng).間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)表明,SMZ-HSA兔多抗、SMZ-RSA兔多抗、SN-HSA兔多抗和SDM-HSA兔多抗檢測(cè)相應(yīng)藥物的靈敏度分別為46.618ng/ml,22.442ng/ml,14

3、.0086ng/ml,73.9970ng/ml;與7種同類藥物的交叉反應(yīng)率最高達(dá)6.9％.SMZ-HAS抗血清經(jīng)飽和硫酸銨沉淀法粗提后,葡聚糖凝膠G200柱分子篩層析,收集主峰蛋白,經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳鑒定,只有一條帶,說(shuō)明其為電泳純.用SMZ-HSA鼠多抗包被硝酸纖維素膜(NC膜),用SMA-HSA純化兔多抗與檸檬酸鈉法制備的膠體金標(biāo)記,制備金標(biāo)蛋白復(fù)合物,建立了檢測(cè)SMA殘留的斑點(diǎn)免疫金滲濾法(DIGFA).該法簡(jiǎn)便、快速,靈