磺胺甲噁唑單克隆抗體的制備及免疫學(xué)快速檢測方法的建立.pdf

1、磺胺類藥物是預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的重要藥物，經(jīng)常作為飼料添加劑使用，是動(dòng)物源性食品中常見的藥物殘留之一，磺胺類藥物殘留能引起人的中毒或過敏性反應(yīng)，并被懷疑有致癌性。作為一種重要的磺胺類藥物，磺胺甲噁唑在磺胺類藥物的使用中占有很大比例。因此，研究出一種操作簡便、快速、靈敏的磺胺甲噁唑殘留檢測方法，對(duì)于動(dòng)物源性食品的安全檢測具有實(shí)際意義。 本研究在分析磺胺甲噁唑免疫學(xué)特性的基礎(chǔ)上，運(yùn)用單克隆抗體技術(shù)制備其單抗，并組裝了競爭ELI

2、SA試劑盒和膠體金試紙。主要研究結(jié)果如下： 1. 磺胺甲噁唑人工抗原的制備與鑒定 采用重氮化方法將磺胺甲噁唑（SMZ）偶聯(lián)于載體牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA），合成免疫原BSA-SMZ 和包被原OVA-SMZ，并利用紫外掃描（UV）和SDS-PAGE凝膠電泳進(jìn)行鑒定，紫外掃描圖譜顯示合成的人工抗原的最大吸收峰發(fā)生偏移，并有－N=N－特征吸收峰出現(xiàn)，證明偶聯(lián)成功，SDS-PAGE結(jié)果表明BSA的泳動(dòng)速度大于BS

3、A-SMZ，說明BSA-SMZ的分子量大于BSA，進(jìn)一步說明SMZ與BSA偶聯(lián)成功。 2. SMZ單克隆抗體的制備及免疫學(xué)特性鑒定 用BSA-SMZ免疫Balb/C小鼠4只，血清效價(jià)檢測后選出細(xì)胞融合小鼠1只，將免疫小鼠脾細(xì)胞與NS0瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，運(yùn)用雜交瘤技術(shù)建立了分泌SMZ單克隆抗體(McAb)的細(xì)胞株。經(jīng)檢測、篩選、克隆化后，獲得3G6、2C10、2F1三株特異敏感的雜交瘤細(xì)胞株，用體內(nèi)誘生腹水法制備SMZ

4、McAb，經(jīng)鑒定其中親和力較好的3G6對(duì)SMZ的IC50為12.40μg/L，與磺胺嘧啶的交叉反應(yīng)率為2.84％，與其他同類磺胺類藥物無交叉反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)制備的SMZ McAb可用于SMZ殘留檢測的免疫學(xué)試驗(yàn)。 3. 磺胺甲噁唑殘留快速檢測方法的建立 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和膠體金免疫層析試驗(yàn)（GICA）原理，分別組裝了SMZ殘留快速檢測競爭ELISA試劑盒和快速檢測免疫金標(biāo)試紙（SMZ-Strip）。SMZ-Kit的標(biāo)準(zhǔn)曲