磺胺嘧啶單克隆抗體的制備及其在免疫學(xué)檢測中的應(yīng)用.pdf

1、磺胺嘧啶（Sulfadiazine，SD）是人工合成的抗菌藥物，具有抗菌譜廣、價廉、使用方便的特點(diǎn)，被廣泛用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中。同時磺胺嘧啶藥物具有諸多副作用，它可在動物體內(nèi)殘留，并通過動物源性食品借食物鏈以低劑量傳遞，直接威脅到人類身體健康。 檢測SD殘留的方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜法、聯(lián)用技術(shù)、毛細(xì)管電泳法和免疫化學(xué)測定法等。免疫學(xué)分析技術(shù)以其靈敏、特異、快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)在藥物殘留檢測領(lǐng)域已被廣泛應(yīng)用。本研究內(nèi)容主要包括

2、SD人工抗原的合成：抗SD單克隆抗體（Monoclonal Antibody， mAb）制備；SD殘留檢測試劑盒研制和SD殘留膠體金試紙研制等方面。 通過分析SD分子結(jié)構(gòu)和免疫原性，采用重氮化法將SD偶聯(lián)于牛血清白蛋白（BSA）和雞卵清蛋白（OVA），合成人工免疫原BSA-SD和包被抗原OVA-SD，通過紫外掃描、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鑒定，證明BSA-SD和OVA-SD偶聯(lián)成功。 用BSA-SD

3、免疫BALB/c小鼠后，應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)篩選出1株高親和力、高特異性雜交瘤細(xì)胞株（685-E4）。用體內(nèi)誘生腹水法制備SD mAb。競爭ELISA測定其IC50為1．155 μg/L，與磺胺甲基嘧啶（SM1）的交叉反應(yīng)性為0．8％，與其它磺胺類同系物的交叉性均小于0．1％。 應(yīng)用SD mAb研制出SD殘留競爭ELISA試劑盒，靈敏度為0．25μg/L，線性檢測范圍為0～4μg/L；試劑盒對尿樣的平均回收率為118．5％；對奶樣的