小麥抗條銹病基因Yr5分子標(biāo)記的鑒定.pdf

1、小麥條銹病是一種世界性病害,嚴重威脅著小麥生產(chǎn).在抗病育種中應(yīng)用分子標(biāo)記輔助選擇有利于實現(xiàn)抗條銹病多基因積累,加速持久抗病品種的培育進程.以小麥抗條銹病基因Yr5的供體親本Triticum spelta album作為對照,對近等基因系Yr5/6×Avocet S和感病親本Avocet S進行RAPD分析.擴增產(chǎn)物用4﹪變性PAGE分離,銀染顯色.可以檢測到50~100條帶,是瓊脂糖凝膠電泳的5倍以上.該研究篩選了240個隨機引物,發(fā)現(xiàn)

2、23條穩(wěn)定的多態(tài)性DNA片段.可見,該方法顯著提高了小麥RAPD分析的多態(tài)性水平.而且,由于PAGE能夠穩(wěn)定檢出低拷貝的擴增片段,也改善了RAPD分析的重復(fù)性.對小麥抗條銹病基因Yr5的近等基因系材料,提取接種后12h、24h、48h葉片的總RNA,制備三個時間段的cDNA模板.根據(jù)已克隆R基因普遍具有的NBS結(jié)構(gòu)域的P-loop、Kinase-2a、Kinase-3a、EGF區(qū)設(shè)計5條RGA簡并引物,組成5對引物組合.用相同的模板與引

3、物,在低嚴謹條件下擴增,獲得4條多態(tài)性片段;在高嚴謹條件下擴增,發(fā)現(xiàn)1條多態(tài)性片段D-4.將引物組合N<,1>-E<,1>擴增抗病和感病材料的產(chǎn)物分別回收作為模板,用引物組合K<,2a>-E<,1>和Touch down程序再擴增,檢測到1條550bp左右差異DNA帶,記為RD-1;將引物組合K<,2a>-E擴增抗病和感病材料的產(chǎn)物分別回收作為模板,用引物組合K<,3a>S-E<,1>和Touch down程序再擴增,檢測到1條470b