小麥抗條銹基因Yr15分子標(biāo)記的鑒定.pdf

1、我國小麥條銹病危害普遍而嚴(yán)重，由于條銹病菌的高度變異性，導(dǎo)致很難對小麥條銹病進(jìn)行持續(xù)有效的控制。在抗病育種中應(yīng)用分子標(biāo)記輔助選擇有利于實(shí)現(xiàn)抗條銹病多基因積累，從而加速持久抗病品種的培育進(jìn)程。　　在1910年Yr15基因發(fā)現(xiàn)于以色列北部野生小麥Triticumdicoccoides中，大量研究證明該基因?qū)Ξ?dāng)前流行小種抗性良好。因而，以小麥抗條銹病Yr15基因?yàn)檠芯繉ο?，對于抗條銹基因的分子標(biāo)記輔助選擇、圖譜克隆和基于抗病基因同源序列克隆

2、抗條銹病基因有重要價(jià)值。　　RGA標(biāo)記技術(shù)是利用抗病基因具有保守結(jié)構(gòu)域的特性，通過人工合成引物對基因組DNA進(jìn)行定點(diǎn)擴(kuò)增，在全基因組水平上檢測DNA變異。在本實(shí)驗(yàn)中，首先以小麥抗條銹病基因Yr15的近等基因系Yr15/6×AvocetS和感病親本AvocetS為材料進(jìn)行RGA分析。擴(kuò)增產(chǎn)物用4％變性聚丙烯酰氨分離，銀染顯色?？梢詸z測到30～70條帶，是瓊脂糖凝膠電泳檢測的5倍以上。本研究根據(jù)已克隆R基因普遍具有的NBS結(jié)構(gòu)域的P-lo

3、op、Kinase-2a、Kinase-3a和LRR區(qū)設(shè)計(jì)49條RGA引物，組成442對引物組合，發(fā)現(xiàn)2條穩(wěn)定的多態(tài)性DNA片段。而且，由于PAGE能夠穩(wěn)定檢出低拷貝的擴(kuò)增片段，大大地改善了RGA分析的重復(fù)性。其次，對2條多態(tài)性DNA片段與Yr15基因的遺傳連鎖性進(jìn)行初步檢測，確定了由引物XaILR-F和PtoFen-S擴(kuò)增的Yr15-R1，以及由引物XaILR-R和Pto-kin2IN擴(kuò)增的Yr15-R2兩條多態(tài)性片段都與Yr15基因