畜禽隱孢子蟲某些生物學(xué)特性研究.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文畜禽隱孢子蟲某些生物學(xué)特性研究姓名：張龍現(xiàn)申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：蔣金書2002.5.1現(xiàn)成熟裂殖體內(nèi)裂殖子釋放方式的多樣性并觀察到小配子從成熟配子體的釋放方式；滋養(yǎng)體內(nèi)充滿直徑約0 ．6 u m 的球形顆粒．I 型裂殖體8 個裂殖子呈逆時針旋渦狀或呈桔瓣狀排列．I I 型裂殖體內(nèi)含4 個裂殖子，兩種類型裂殖體的裂殖子之間填充直徑0 ．3 p m 球形顆粒殘體并包圍著一個大的球形殘體：帶蟲空泡

2、可分為有球形殘體和無球形殘體兩類，在球形殘體下部與宿主細(xì)胞質(zhì)之間有一均勻豎向排列的纖維狀結(jié)構(gòu)，無殘體帶蟲空泡底部有微孔狀結(jié)構(gòu)和分泌物殘跡，根據(jù)觀察結(jié)果推測帶蟲空泡基部的梳狀結(jié)構(gòu)不具營養(yǎng)器官的功能，營養(yǎng)通道應(yīng)為帶蟲空泡的底部．蟲體可以寄生于杯狀細(xì)胞頂部．系統(tǒng)觀察到子孢子或裂殖子在鉆入宿主細(xì)胞過程中由前端尖錐形演變到球形，再逐漸過渡到后端呈球形，前端呈圓錐狀．鉆入之后發(fā)育成球形的滋養(yǎng)體．4 ．本試驗成功建立聚合酶鏈反應(yīng)( P e R ) 檢

3、測技術(shù)和巢式聚合酶鏈反應(yīng)( N e s t e dP C R ) 檢測技術(shù)，并結(jié)合D N A 快速純化技術(shù)，可以直接檢測家畜糞便中隱孢子蟲卵囊．兩種P e R 均為隱孢子蟲屬特異性，P C R 的最低檢測值為1 0 0 個卵囊／m 1 ．糞便中卵囊最低檢測值為1 0 ‘個卵囊／m l ，即1 0 5 個卵囊／g 糞便．巢式P C R 最低檢測值< 2 ．8 6 個卵囊／m 1 ．糞便中卵囊最低檢測值為< 2 個卵囊／m l

4、，即2 0 個卵囊／g 糞便．巢式P C R 擴增片段S s p I 酶切結(jié)果：安氏隱孢子蟲( C r y p t o s p o r i d i u ma n d e r s o n i ) 經(jīng)過酶切后產(chǎn)生4 2 0 b p 和3 6 1 b p 兩個片段，￡b a i l e y i 產(chǎn)生5 4 5 b p 和2 3 1 b p 兩個片段．從結(jié)果看本試驗所檢測的6 個分離株可以明顯區(qū)分為C a n d e r s o n i 和C

5、拋i l e y i 兩個種．5 ． 首次將巢式P C R 擴增片段序列用于隱孢子蟲種系發(fā)育研究，D N A S t a r 分析軟件聚類分析所做進化樹表明安徽奶牛分離株和北京奶牛分離株與小鼠隱孢子蟲( C ．m u r i s ) ?；蛐?，即現(xiàn)在的安氏隱孢子蟲( ￡a n d e r s o n D 最為接近，同源性達(dá)到9 9 ．9 j l 和1 0 0 ％，形成一個單系群；寧夏雞源分離株、北京雞源分離株和河南鴨源分離株在進化樹上形