黃姑魚雌核發(fā)育的誘導(dǎo)、鑒定及性別決定機制的初步研究.pdf

1、本文以黃姑魚為研究對象，采用同源精子誘導(dǎo)黃姑魚雌核發(fā)育二倍體，利用形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞儀及微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)對雌核發(fā)育苗種進行了鑒定，同時，探索了異源精子誘導(dǎo)黃姑魚卵進行雌核發(fā)育的條件，并且對黃姑魚雌核發(fā)育后代的生長特性及性別決定機制進行了初步探討，旨在為黃姑魚性別控制和遺傳育種工作提供重要的技術(shù)手段和科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1、采用紫外線(UV)照射的方法對同源精子進行遺傳物質(zhì)的滅活，進一步通過冷休克的方法抑制第二極體排放進行

2、倍性恢復(fù)，成功獲得黃姑魚雌核發(fā)育二倍體。結(jié)果顯示，黃姑魚精子的紫外線照射劑量與所獲胚胎的受精率、單倍體率以及孵化率之間呈現(xiàn)出典型的Hertwig效應(yīng)，黃姑魚精子遺傳滅活的最佳劑量為420 mJ/cm2;冷休克處理法能夠成功抑制黃姑魚受精卵第二極體的排放，冷休克的起始時刻、持續(xù)時間以及處理溫度均會對誘導(dǎo)效果產(chǎn)生一定影響，綜合考慮雌核發(fā)育二倍體的孵化率和誘導(dǎo)率等因素，最適的染色體加倍條件為授精后2min在3℃的海水中處理8min。采用形態(tài)學(xué)

3、觀察、流式細(xì)胞儀檢測兩種方法對初孵仔魚進行了鑒定，鑒定結(jié)果為雌核發(fā)育二倍體。進一步利用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)對遺傳物質(zhì)在親本與子代中的傳遞情況進行了分析，結(jié)果表明雌核發(fā)育后代與母本保持了高度的同質(zhì)性。
　　2、對異源精子誘導(dǎo)黃姑魚雌核發(fā)育進行了初步探索。選用條石鯛精子作為異源精子，利用紫外線照射法對條石鯛精子的遺傳物質(zhì)進行滅活，滅活后的精子與黃姑魚卵進行人工授精，獲得了雌核發(fā)育單倍體受精卵，采用冷休克的方法對雌核發(fā)育單倍體受精卵進行倍性恢

4、復(fù)，成功獲得了黃姑魚雌核發(fā)育二倍體魚苗，但誘導(dǎo)率很低。
　　3、初步探究了黃姑魚雌核發(fā)育二倍體的生長特性，推斷了黃姑魚的性別決定機制。對雌核發(fā)育二倍體的生長指標(biāo)進行統(tǒng)計分析，深入了解黃姑魚雌核發(fā)育后代的養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)特征。同時，運用組織切片的方法對培育至11月齡的黃姑魚普通二倍體和雌核發(fā)育二倍體進行性別鑒定。實驗結(jié)果表明:黃姑魚普通二倍體的雌雄性別比例接近于1∶1，而在隨機解剖的80尾11月齡雌核發(fā)育二倍體中，雌性所占百分比為97.5