棉花黃萎病菌落葉型菌系在山東的分布、毒素測定及生防細菌篩選.pdf

1、棉花黃萎病是山東棉花生產(chǎn)中最嚴重的病害，年發(fā)生面積700多萬畝，常造成巨大的經(jīng)濟損失，直接影響我省的棉花生產(chǎn)。近年來，棉花黃萎病菌（Verticillium dahliae.Kleb）的致病力發(fā)生了明顯變化，特別是落葉型菌系在田間的廣泛出現(xiàn)，對我省的棉花生產(chǎn)造成越來越嚴重的影響。因此，了解落葉型菌系的特點及其在山東的分布，對有效控制棉花黃萎病的發(fā)生及傳播，具有十分重要的意義。本研究從山東德州、東營和泰安等地棉花黃萎病發(fā)生田采集病株樣品，

2、經(jīng)分離純化，獲得202株分離物，經(jīng)培養(yǎng)性狀觀察、特異性引物擴增及致病力分析，發(fā)現(xiàn)落葉型菌系在我省分布十分廣泛。對部分菌株的產(chǎn)毒能力及致病力進行了分析，發(fā)現(xiàn)各菌株產(chǎn)毒能力有較大差異。從不同地區(qū)采集土壤樣本，篩選、鑒定出對黃萎病菌有明顯拮抗作用的細菌菌株8株，為進一步對棉花黃萎病的生物防治提供了菌株材料。具體研究結(jié)果如下：
　?、庞诿藁S萎病盛發(fā)期，從山東德州、東營、泰安等地采集棉花黃萎病標本，采用組織分離法，獲得202株分離物。

3、r>　?、茖Ω骶甑呐囵B(yǎng)特征觀察表明，202株分離物中，201株為菌核型，菌落黑色、白色氣生菌絲稀薄或濃密，產(chǎn)生大量微菌核;1株為菌絲型，菌落白色、菌絲棉絮狀、無微菌核和黑色素產(chǎn)生。
　?、怯么篼惢ㄝ喼╒erticillium dahliae）特異性引物DB19/DB22對202株分離物進行PCR擴增，發(fā)現(xiàn)所有分離物均可擴增出一條530bp左右的特異性條帶，表明202株分離物均為V.dahliae。
　　⑷為分析落葉型菌

4、系在山東的分布，分別用2對特異性引物(INTD2f/INTD2r和INTND2f/INTND2r)對202株分離物進行PCR擴增，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其中201個分離物都在INTD2f/INTD2r作用下擴增出一條460bp左右的特異性條帶，表明這些菌株為落葉型菌系，占所有分離物的99.5％;僅有1株分離物（HLX5-1-1）在非落葉型引物INTND2f/INTND2r作用下擴增出一條800bp左右的條帶，占所有分離物的0.5％。表明落葉型菌系在

5、山東各棉區(qū)分布廣泛。
　?、呻S機選取8株分離物對其產(chǎn)毒能力、毒素對棉花種子萌發(fā)和棉苗的致萎作用進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株HDF4-3-1產(chǎn)毒能力最強，菌株3-5毒素產(chǎn)生量最小，表明不同菌株的產(chǎn)毒能力具有差異。用毒素處理棉花種子和幼苗，發(fā)現(xiàn)菌株HDF5-3-1的抑制率和致萎指數(shù)最高，非落葉型菌系HLX5-1-1最低，表明不同菌株的致病力存在差異。
　?、蕼y定了8株生防細菌的拮抗效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn):菌株JK-14對黃萎病菌的抑菌半徑最大