稻瘟病菌抗稻瘟靈分子機理初步研究.pdf

1、稻瘟病是水稻上重要的病害，每年對水稻生產(chǎn)造成很大損失。稻瘟靈是上世紀(jì)70年代研制的用于防治稻瘟病的常用殺菌劑，它主要通過抑制甲基轉(zhuǎn)移酶的活性，從而抑制磷脂酰膽堿合成前的轉(zhuǎn)甲基作用，影響磷脂類的生物合成。目前從大田中分離到的稻瘟病菌對稻瘟靈大都屬于敏感或抵抗型，但是在實驗室內(nèi)，利用藥劑篩選的方法，卻很容易得到抗藥性菌株?；诖?，我們從基因序列水平和轉(zhuǎn)錄水平上對抗性菌株和敏感菌株間的差異進(jìn)行研究，尋找與抗藥性相關(guān)的基因，為稻瘟病菌對稻瘟靈抗

2、性的分子機理研究奠定基礎(chǔ)。
　　 本文利用藥劑篩選的方法，得到了3個稻瘟靈中抗型的菌株H08-1a mut、H08-1c_mut和H08-6c mut，并對它們的菌絲生長速率、產(chǎn)孢量進(jìn)行了測定。結(jié)果表明3個抗性菌株在以上生物學(xué)性狀上與其對應(yīng)的野生型菌株并無差異，表現(xiàn)出良好的適應(yīng)性。同時，我們還對從田間分離的400多株稻瘟菌菌株進(jìn)行了抗性檢測，并未檢測到明顯的稻瘟靈抗性菌株。RAPD和ISSR分子標(biāo)記常用于各種生物的遺傳多樣性分析

3、，本研究中，也采用此技術(shù)在DNA水平上對抗性菌株及其敏感親本菌株進(jìn)行多態(tài)性分析，雖然發(fā)現(xiàn)數(shù)個引物能擴增出多態(tài)性條帶，但對這些多態(tài)性條帶對應(yīng)的區(qū)域進(jìn)行測序后，發(fā)現(xiàn)抗性及敏感菌株在引物結(jié)合位點上并無變化。將抗性菌株和敏感菌株用稻瘟靈處理后，比較它們在基因表達(dá)水平上的差異，發(fā)現(xiàn)共有755個基因差異表達(dá)，在H08-1a mut中找到了142個上調(diào)表達(dá)，613個下調(diào)表達(dá)的基因。將這些基因在功能上分類，發(fā)些這755個基因只有23個基因功能已知，即參

4、與已知的生化過程，其余基因功能均未知。其中MGG_09793基因的轉(zhuǎn)錄水平差異最明顯。構(gòu)建敲除載體，將H08-1a mut和H08-1a中的MGG_09793基因進(jìn)行敲除，得到敲除轉(zhuǎn)化子后，測定它們對稻瘟靈的敏感性、菌絲生長速率及產(chǎn)孢量，發(fā)現(xiàn)它們與出發(fā)菌株在這些性狀上沒有明顯差異，說明MGG_09793并不是稻瘟靈抗藥性產(chǎn)生的靶標(biāo)基因，可能它只是與稻瘟靈代謝相關(guān)的基因。上述研究結(jié)果為進(jìn)一步闡明稻瘟靈抗藥性產(chǎn)生的分子機理提供了可參考的信息