Mechanism of Somatostatin and its Receptors in Regulation of Apoptosis and Steroidogenesis of Mouse Sertoli cells and Bovine Gr.pdf

1、目前生長(zhǎng)抑素及其受體在垂體上已得到廣泛研究。這主要是由于垂體中的生長(zhǎng)激素細(xì)胞釋放生長(zhǎng)激素(GH)。這些操作技術(shù)的進(jìn)步揭示了這些受體新的生物學(xué)功能，特別是他們調(diào)控生理機(jī)能和抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞特異性生長(zhǎng)抑素受體信號(hào)可以使得我們了解垂體激素控制和細(xì)胞增殖的原理。然而，目前這些受體在性腺上的研究很有限。
　　1.生長(zhǎng)抑素及其受體對(duì)小鼠支持細(xì)胞凋亡和生長(zhǎng)的功能調(diào)控。
　　最近研究表明，支持細(xì)胞是生長(zhǎng)抑素(SST)多肽調(diào)控的靶細(xì)胞

2、。因此，本研究用SRIF14處理小鼠支持細(xì)胞探究生長(zhǎng)抑素受體表達(dá)及其與年齡的關(guān)系與同源調(diào)控。另外，還檢測(cè)了細(xì)胞增殖、凋亡率和相關(guān)調(diào)控基因的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，支持細(xì)胞可以表達(dá)SST15型受體。不同日齡小鼠用實(shí)時(shí)熒光定量PCR在mRNA水平檢測(cè)受體表達(dá)，發(fā)現(xiàn)SSTR2和SSTR5在支持細(xì)胞發(fā)育階段大量表達(dá)。另外，SRIF14處理細(xì)胞后與對(duì)照組相比并沒(méi)有顯著提高這兩個(gè)受體的表達(dá)量，說(shuō)明受體表達(dá)不受SRIF14影響。生長(zhǎng)抑素以劑量依賴方式調(diào)節(jié)腺苷

3、酸環(huán)化酶激活劑誘導(dǎo)的cAMP的產(chǎn)生。低劑量(100pm和10nm)和高劑量(1μm)組明顯促進(jìn)了G1期細(xì)胞凋亡，并有劑量依賴關(guān)系(p＜0.05)。WesternBlot分析發(fā)現(xiàn)，casp3和P21的表達(dá)增加，bcl2和Igf1的表達(dá)降低，證實(shí)了上述結(jié)果。生長(zhǎng)抑素同樣以劑量依賴方式在mRNA水平抑制kit1基因的表達(dá)，后者是調(diào)控精子生成的重要基因。本研究結(jié)果表明，生長(zhǎng)抑素及其受體（SSTR2和SSTR5）是調(diào)節(jié)支持細(xì)胞發(fā)育的重要標(biāo)記，可通

4、過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和阻滯細(xì)胞周期對(duì)支持細(xì)胞發(fā)育表現(xiàn)出生理抑制作用。
　　2.生長(zhǎng)抑素受體2和5的構(gòu)型激活及其與促卵泡素相互作用對(duì)未成年小鼠支持細(xì)胞凋亡的調(diào)控
　　生長(zhǎng)抑素受體2和5是未成年小鼠支持細(xì)胞凋亡的主要調(diào)控因子，降低了SSTR2和SSTR5在蛋白水平上的表達(dá)。另外，本研究利用短發(fā)夾RNA分別沉默了SSTR2和SSTR5基因并分析了轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后短發(fā)夾RNA在mRNA水平對(duì)SSTR2和SSTR5分別下調(diào)了54％和

5、62％。小鼠SSTR2和SSTR5基因沉默抑制了cAMP水平的升高（最高效載體分別達(dá)到145％和89％）和ERK1/2磷酸化。另外，受體基因沉默對(duì)cAMP水平升高的影響被百日咳毒素所阻斷。生長(zhǎng)抑素受體2和5在小鼠支持細(xì)胞中構(gòu)型被激活，在蛋白質(zhì)水平下調(diào)caspase3，上調(diào)Bcl2，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡（SSTR2=SSTR5，p＜0.05）。此外，用FSH處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡率（平均5.5％，p＜0.05）比對(duì)照組(9.6％)明顯降低。

6、上述結(jié)果表明，SSTR2和SSTR5可能通過(guò)構(gòu)型激活調(diào)節(jié)支持細(xì)胞凋亡，獨(dú)立于其配體。另外，這兩種受體作為內(nèi)源FSH抑制因子在睪丸發(fā)育的重要時(shí)期可能對(duì)支持細(xì)凋亡有重要作用。
　　3.構(gòu)型和促卵泡素誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑素受體2在牛顆粒細(xì)胞凋亡和類固醇激素合成中的作用
　　利用原代牛顆粒細(xì)胞作為細(xì)胞模型研究生長(zhǎng)抑素受體2在維持卵巢功能中的潛在作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，牛顆粒細(xì)胞表達(dá)SSTR2受體，用FSH處理顆粒細(xì)胞后SSTR2受體在蛋白水平表達(dá)顯

7、著提高，提示SSTR2很可能受FSH調(diào)節(jié)。進(jìn)一步用小干擾RNA片段進(jìn)行沉默，并在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平分別測(cè)定其對(duì)SSTR2的干擾效率，證明內(nèi)源性SSTR2表達(dá)被阻斷，證明SSTR2的構(gòu)型激活對(duì)顆粒細(xì)胞具有調(diào)節(jié)作用，因?yàn)閏AMP水平升高2.4倍，孕激素基礎(chǔ)分泌量升高2倍(p＜0.05)，StAR和P450ssc在mRNA水平顯著上調(diào)，但雌激素水平和芳香酶在mRNA水平無(wú)明顯變化。此外，沉默SSTR2后顆粒細(xì)胞凋亡降低52.5％(p＜0.05)，

8、促進(jìn)了細(xì)胞增殖。印記檢測(cè)后續(xù)蛋白，發(fā)現(xiàn)Bcl-2表達(dá)上調(diào)，而caspase3和Bax表達(dá)下調(diào)。這些結(jié)果表明，SSTR2亞型不依賴生長(zhǎng)抑素且通過(guò)選擇性構(gòu)型調(diào)控顆粒細(xì)胞凋亡、增殖和激素分泌。假設(shè)SSTR2對(duì)性腺有局部抑制作用，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染ssRNAi-2后，細(xì)胞凋亡率顯著降低（分別為6.8％和1.9％，p＜0.05），比FSH處理的效果更明顯。凋亡蛋白表達(dá)和類固醇激素mRNA水平與凋亡率降低和孕激素分泌量增加有關(guān)。本研究結(jié)果表明，SSTR2可能