重組豬α干擾素與黃芪多糖聯(lián)合應用的研究.pdf

1、本試驗主要是以重組豬α干擾素和中草藥提取物黃芪多糖聯(lián)合應用為出發(fā)點，通過研究豬α干擾素基因的克隆與表達、重組豬α干擾素的純化及活性測定、干擾素與黃芪多糖聯(lián)合用藥研究三個方面，研究豬α干擾素與黃芪多糖之間的聯(lián)合互作，以期研制出抗病毒活性高、免疫調節(jié)活性強的抗病毒復方制劑，為健康養(yǎng)殖提供理論指導。
　　一、豬α干擾素的原核表達
　　為了研究高效廣譜的基因工程抗病毒制劑，使用實驗室構建的豬α干擾素原核表達載體pET30a-pIFN

2、-α，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達了豬α干擾素，此表達的產物為一融合蛋白。SDS-PAGE電泳后在26.5kD處出現(xiàn)了一條特異性的條帶，同預期結果基本一致。經過IPTG誘導后，豬α干擾素的表達產量顯升高，表達量約占細菌總蛋白量的28％，純化后的豬α干擾素純化度在95％以上，可以用來抗病毒活性檢測試驗。
　　二、豬α干擾素的活性測定
　　采用在Marc-145細胞上用細胞病變抑制法測定重組豬α干擾素的活性。結果表明:測得

3、重組豬α干擾素抗PRRSV的病毒活性為5.0×104U/mg。在細胞水平上重組豬α干擾素在體外對PRRSV起到有效的抑制作用，為進一步應用于動物試驗提供了參考。
　　三、干擾素與黃芪多糖量和用藥研究
　　利用Marc-145細胞體外培養(yǎng)，通過CPE和MTT法測定了黃芪多糖在Marc-145細胞上的最大無毒濃度，計算了半數(shù)抑制濃度。通過綜合評價黃芪多糖抗PRRSV效果和發(fā)展價值，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖和重組豬α干擾素聯(lián)用對抗PRRSV具