重組干擾素上調(diào)草魚干擾素系統(tǒng)基因的表達(dá).pdf

1、在硬骨魚類的疾病防治中，近年來(lái)像抗菌肽、干擾素之類的重組蛋白的使用越來(lái)越受觀注。具有廣譜抗病毒作用的干擾素可能是防治魚病毒性疾病的一種新途徑和新方法，相對(duì)于抗生素和疫苗的使用干擾素是一種更為理想的選擇。
　　 為了研究重組干擾素對(duì)草魚免疫保護(hù)的分子機(jī)理。本文在實(shí)驗(yàn)室前期克隆1個(gè)草魚Ⅰ型干擾素基因的基礎(chǔ)上，利用原核表達(dá)系統(tǒng)獲得草魚重組干擾素。草魚重組干擾素腹腔注射免疫健康草魚，分別于免疫后6、12、24、48、72h檢測(cè)草魚肝、脾

2、、腎、腸、腮、心等組織中干擾素系統(tǒng)基因，包括IFN、IRF-1、IRF-7、STAT-3、MX, PKR的表達(dá)情況。IFN表達(dá)呈現(xiàn)12h明顯上調(diào)，24-48h達(dá)峰值，而后下調(diào)的特點(diǎn)。在腎、脾、腮、肝、腸組織中IRF7表達(dá)12h明顯上調(diào)，直到72h還能維持較高水平。各組織STAT-3在6h表達(dá)明顯上調(diào)，表達(dá)強(qiáng)烈，而后直到72h能維持較高水平，在腎、脾、腮中表達(dá)更為強(qiáng)烈。MX1表達(dá)6h后上調(diào)，12h明顯被激活表達(dá)，一直持續(xù)到48h，72h有

3、所下降。在腸和心中相對(duì)表達(dá)較弱。PKR本底中表達(dá)較弱，6h上調(diào)并有較高水平表達(dá)，然后一直持續(xù)至72h，在腎、脾、腮中有較高水平表達(dá)。與Poly I∶C的誘導(dǎo)效果相比，重組干擾素誘導(dǎo)草魚干擾素系統(tǒng)基因表達(dá)上調(diào)更快、更強(qiáng)烈。在前面實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，腹腔注射免疫12h后，熒光定量檢測(cè)草魚肝、脾、腎、腸、腮、心等組織中IFN、IRF-1、IRF-7、STAT-3、MX, PKR的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:免疫后12h，在肝、脾、腎、腮，腸、心組織中這6個(gè)基

4、因表達(dá)顯著增強(qiáng)。其中，肝臟組織中IFN、IRF-1、IRF-7、MX, PKR、STAT-3的表達(dá)量分別為對(duì)照組的9.32、9.00、8.00、10.3、10.3、3.1倍;脾臟組織中其表達(dá)量分別為對(duì)照組6.29、3.00、25.18、20.753、0.934、10.934倍;腎臟組織中其表達(dá)量分別為對(duì)照組6.651、9.00、10.44、8.652、10.566、5.460倍;腮中分別為4.56、7.23、13.0、13.49、1.9

5、85、19.150倍。另外，腸、心組織中有的也有明顯上調(diào)，腸中其表達(dá)量分別為1.692、3.00、3.67、4.580.881、6.81倍;心組織中分別為1.68、6.00、1.47、1.180、1.948、5.890倍。
　　 重組干擾素拌料投喂健康草魚分別于投喂后12、24、48、72h，經(jīng)RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)草魚肝、脾、腎、腸、腮、心各組織中IFN的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:也能誘導(dǎo)各個(gè)組織中IFN基因的表達(dá)，從表達(dá)的時(shí)序上看，

6、也呈現(xiàn)先上調(diào)，然后到一個(gè)峰值，而后下降的特點(diǎn)。比較各組織IFN表達(dá)特征，在肝、腎、脾、腮4個(gè)組織中IFN基因表達(dá)更強(qiáng)烈，而在腸和心中表達(dá)較弱些。在此基礎(chǔ)上，投喂后12h熒光定量檢測(cè)草魚肝、脾、腎、腸、腮、心組織中IFN基因的表達(dá)情況。結(jié)果也顯示:各個(gè)組織中IFN基因都有表達(dá)，比較各組織IFN表達(dá)特征，在肝、腎、脾、腮4個(gè)組織中IFN基因表達(dá)更強(qiáng)烈，而在腸和心中表達(dá)較弱些。
　　 這些結(jié)果表明重組干擾素能上調(diào)草魚IFN、IRF-1