干擾素釋放試驗(yàn)

1、,Y-干擾素釋放試驗(yàn)的臨床應(yīng)用,,Y干擾素釋放試驗(yàn)(interferon．1 release assays）， IGRA是檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌(MTB)特異性抗原刺激T細(xì)胞產(chǎn)生的Y干擾素，以判斷是否存在MTB的感染。IGRAs可彌補(bǔ)PPD試驗(yàn)的不足，目前多個(gè)國(guó)家已將其用于診斷MTB潛伏感染(1atent tuberculosis infection，LTBI)，我國(guó)部分醫(yī)院也已常規(guī)開(kāi)展此項(xiàng)檢測(cè),,,目前國(guó)際上較成熟的IGRAs有2種

2、：(1)全血法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)全血中致敏T細(xì)胞再次受到MTB特異性抗原刺激后釋放的1．干擾素水平，稱之為全血檢測(cè)或結(jié)核感染T細(xì)胞免疫檢測(cè)；(2)細(xì)胞法：采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技(ellzymelinkedimmunospot assay，ELISPOT)測(cè)定在MTB特異性抗原刺激下，外周血單個(gè)核細(xì)胞中能夠釋放1一干擾素的效應(yīng)T細(xì)數(shù)量，稱之為細(xì)胞檢測(cè)或結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)。上述2種檢測(cè)方法的原理類似，檢測(cè)技術(shù)和操作程

3、序略有不同，均采用MTB的RDl區(qū)基因編碼抗原多肽作為特異性抗原，主要相對(duì)分子質(zhì)量為6 000的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和相對(duì)分子質(zhì)量為10 000的培養(yǎng)濾液蛋白(CFP一10)抗原或抗原多肽,T-SPOT試驗(yàn),30,IGRAs的結(jié)核特異免疫抗原,SAT-6和CFP一10主要存在于MTB復(fù)合群，而在卡介苗和大多數(shù)NTM中缺失，因此IGRAs的特異度較好。但ESAT-6和CFP—10也存在于少數(shù)幾種NTM中，如堪薩斯分枝桿菌、海分

4、枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、轉(zhuǎn)黃分枝桿菌和胃分枝桿，故IGRAs陽(yáng)性不能排除上述幾種NTM感染的可能。,PPD試驗(yàn)與IGRAs的對(duì)比,PPD試驗(yàn)作為診斷MTB感染的傳統(tǒng)方法，具有操作簡(jiǎn)便、成本低廉的特點(diǎn)，至今仍廣泛使用，但該方法使用的PPD抗原成分復(fù)雜，易受卡介苗接種和非結(jié)核分枝桿菌(nontuberculosismyeobacterium，NTM)的影響，特異度較低，且對(duì)人免疫缺陷病毒(HIV)感染及重癥疾病患者等免疫功能受損人群的敏感

5、度不足。薈萃分析結(jié)果顯示，在HIV感染人群中，IGRAs的敏感度并未高于PPD試驗(yàn)，但I(xiàn)GRAs(尤其是細(xì)胞檢測(cè))受CD4+T細(xì)胞數(shù)量的影響小于PPD試驗(yàn)，這可能因?yàn)镮GRAs檢測(cè)過(guò)程已對(duì)單個(gè)核細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化，即在檢測(cè)程序上消除了淋巴細(xì)胞數(shù)量減少對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,PPD陽(yáng)性對(duì)以下情況無(wú)法區(qū)分,卡介苗預(yù)防接種√非結(jié)核分枝桿菌感染√LIBI √活躍結(jié)核病√結(jié)核病治愈、自愈后√,IGRAs陽(yáng)性,卡介苗預(yù)防接種ⅹ大多數(shù)非結(jié)核

6、分枝桿菌感染ⅹ LIBI √活躍結(jié)核病√結(jié)核病治愈、自愈后√,,2010年 全國(guó)結(jié)核病流行病抽樣調(diào)查結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群 77.1%，非結(jié)核分枝桿菌22.9%2010年廣州結(jié)核病流行病抽樣調(diào)查：非結(jié)核分枝桿菌19.3%，且其中前5位IGRAs為陰性的,IGRAs的敏感性和特異性,美國(guó)FDA認(rèn)證臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：經(jīng)培養(yǎng)確診的結(jié)核病患者樣本183例敏感性95.6%（175∕183）306例入伍新兵特異性97.1%（29

7、7 ∕ 306）,,對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病的輔助診斷：PPD試驗(yàn)和IGRAs均無(wú)法區(qū)分LTBI和活動(dòng)性結(jié)核病患者。國(guó)內(nèi)IGRAs的研究數(shù)據(jù)顯示其敏感度和特異度差別較大，敏感度為53％一98％，特異度為60％～90％(或以上)，但多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的敏感度和特異度>70％，提示IGRAs的特異度優(yōu)于PPD試驗(yàn)。,IGRA用于診斷肺結(jié)核：深圳第三人民醫(yī)院的結(jié)果,,,,中國(guó)的國(guó)情適用IGRAs嗎？,Y-干擾素釋放試驗(yàn)在中國(guó)應(yīng)用的建議,IGRAs可以有

8、,考慮到我國(guó)肺結(jié)核患者中菌陰肺結(jié)核所占比例較高，在診斷這類患者缺乏細(xì)菌學(xué)依據(jù)時(shí)，IGRAs可發(fā)揮其輔助作用應(yīng)用于活動(dòng)性結(jié)核病的輔助診斷應(yīng)用于LTBI診斷中,IGRAs用于體液或組織標(biāo)本？,近幾年來(lái)國(guó)內(nèi)有IGRAs(僅限于ELISPOT方法)輔助診斷結(jié)核性胸膜炎和結(jié)核性腹膜炎等肺外結(jié)核的報(bào)道，其中采用胸腔積液和腹水等體液或組織標(biāo)本檢測(cè)的IGRAs的敏感度和特異度高達(dá)90％以上，采用血液標(biāo)本檢測(cè)時(shí)IGRAs則并未顯示出優(yōu)勢(shì)。 此類

9、研究報(bào)道數(shù)量不多，病例數(shù)也不足，且國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)的IGRAs僅限于血液樣本的檢測(cè)，即IGRAs對(duì)體液或組織標(biāo)本的研究尚未經(jīng)過(guò)充分驗(yàn)證，不能得出可靠的結(jié)論。,IGRAs對(duì)兒童結(jié)核病的輔助診斷,兒童結(jié)核病的臨床癥狀不典型，重癥及肺外結(jié)核病比例較高，且結(jié)核病患兒的細(xì)菌載量低，咳嗽反射和氣管纖毛運(yùn)動(dòng)能力差，病原學(xué)檢查陽(yáng)性率很低，PPD試驗(yàn)和IGRAs聯(lián)合診斷有一定的輔助作用。,IGRAs在LTBI診斷中的應(yīng)用,1．活動(dòng)性肺結(jié)核

10、患者密切接觸者和醫(yī)務(wù)工作者中LTBI的診斷2．IGRAs在HIV感染等免疫抑制或缺陷患者LTBI診斷中的應(yīng)用,活動(dòng)性肺結(jié)核患者密切接觸者和醫(yī)務(wù)工作者中LTBI的診斷,1.PPD試驗(yàn)和IGRAs均可用于LTBI的診斷和追蹤，若考慮到PPD試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果可能受卡介苗接種或NTM影響時(shí)，可對(duì)PPD試驗(yàn)陽(yáng)性者進(jìn)一步采用IGRAs幫助確認(rèn)；(2)不宜采用IGRAs對(duì)大范圍人群進(jìn)行LTBI篩查；(3)PPD試驗(yàn)仍是在健康人群中動(dòng)態(tài)篩查L(zhǎng)

11、TBI的首選。,,(1)對(duì)HIV感染人群進(jìn)行LTBI篩查，單用PPD試驗(yàn)的敏感度不高，應(yīng)單用IGRAs或聯(lián)合使用PPD試驗(yàn)，在方法選擇上優(yōu)先考慮細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)。(2)自身免疫性疾病和器官移植患者在接受糖皮質(zhì)激素或TNF-拮抗劑治療前，應(yīng)單用IGRAs或聯(lián)合使用PPD試驗(yàn)篩查L(zhǎng)TBI。,,除HIV感染者外，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病、器官移植等免疫功能受損患者及糖尿病等特殊患者，因其自身原因，或接受糖皮質(zhì)激素或腫瘤壞死因子 TN

12、F拮抗劑等免疫抑制藥物治療導(dǎo)致免疫功能缺陷，這類患者是LTBI發(fā)展為結(jié)核病的高風(fēng)險(xiǎn)人群，對(duì)這類患者也有必要進(jìn)行LTBI篩查。,應(yīng)行IGRAs和PPD檢測(cè)的6種情況（WHO 2015）,HIV陽(yáng)性者肺結(jié)核病人的接觸者擬進(jìn)行抗TNF治療的患者擬透析的患者擬行器官及造血細(xì)胞移植者矽肺患者,結(jié)語(yǔ),(1)IGRAs可用于診斷MTB感染，但不能區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病和LTBI，也不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)LTBI發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)(2)IGRAs對(duì)