重組乙肝病毒介導(dǎo)的干擾素α的轉(zhuǎn)基因表達(dá).pdf

1、目的:觀察攜帶人干擾素α(IFN-α)基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達(dá)質(zhì)粒在真核細(xì)胞中的復(fù)制表達(dá)效果.方法:將構(gòu)建成功的目的質(zhì)粒(攜帶TNF-α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達(dá)載體pcDNA3-KN-F1F2-IFN-α)以及作為對照的三種質(zhì)粒(克隆雙拷貝全長HBV基因組的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-ES-HBV2、X基因缺失的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-KN-F1F2和空載體pcDNA3),用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法,分別轉(zhuǎn)

2、染肝癌細(xì)胞HepG2,用熒光定量PCR法、ELISA法檢測HBV的復(fù)制表達(dá)水平;ELISA法、RT-PCR法檢測IFN-α表達(dá)水平.結(jié)果:1.建立目的重組病毒KN-F1F2-IFN-α的持續(xù)復(fù)制表達(dá)系統(tǒng)HepG2/KN-F1F2-IFN-α;2.X基因缺失的乙肝病毒(KN-F1F2)較之全長基因組的乙肝病毒(ES-HBV2)復(fù)制表達(dá)水平降低,而且的重組病毒KN-F1F2-IFN-α的復(fù)制表達(dá)水平較之ES-HBV2以及KN-F1F2均降低