36114.重組人干擾素的基因表達以及peg修飾_第1頁
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1、碩士學位論文重組人干擾素的基因表達以及PEG修飾ExpressionandPEGylationofRecombinantHumanInterferon學科專業(yè)：藥物化學研究生：袁永指導教師：王勁峰教授天津大學藥物科學與技術學院二零零八年五月ABSTRACTRecombinantinterferon口isusedclinicallytOtreatavarietyofdiseasesandcancersbecauseofitsantivir

2、al，antiproliferativeandimmunoregulatorypropertiesHowever，thedisadvantageofshortcirculatinghalflifeofIFN一口invivomakesitnotwelcomedbymostpatientsTherefore，thechemicalconjugationofpolyethyleneglycol(PEG)andtheproteininthiss

3、tudyisusedtOovercomethisproblemThefreeeysteineresiduewhichisintroducedbyusingsite—directedmutagenesisSelVeSastheattachmentpointforcovalentmodificationoftheproteinwithacysteine—reactivePEGmolecule，resultinginahomogeneousp

4、roductwithahighbiologicalactivityweexpectTheplasmidcontainingIFN口genewasconstructedbyBolderBiotechnology。anditwasidentifiedbyenzymedigestionandDNAsequencingTheplasmidwastransformatedtoEcoliW3110，anddataofSDS—PAGEandWeste

5、rn—blotindicatedthata19KDproteinwasexpressedintheformofinclusionbodieswithgoodimmunityMeanwhile，theexpressionconditionswerealsooptimizatedandtheresultwasthattemperaturewas37“(2，pHofmediawas70，concentrationofIPTGwas05mM，i

6、nductiontimewasl6hAfterdenaturationandrenaturationofinclusionbodiesthetargetproteininterferon口wasobtainedutilizingionexchangechromatography(IEC)andthepuritywasabove98％Wecangetabout22mgproteinfrom1LmediaFinallyIFN口reactsw

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