重組人-α干擾素基因（Hu-IFN-α）在草魚體內(nèi)的整合與表達(dá).pdf

1、草魚年產(chǎn)量占中國(guó)淡水魚總產(chǎn)量的20﹪.其生長(zhǎng)快、飼料來(lái)源廣、飼養(yǎng)成本低和肉味鮮美.但草魚病害多,危害嚴(yán)重,目前草魚蟲苗種養(yǎng)至成魚的成活率僅為10-15﹪,每年給中國(guó)淡水養(yǎng)殖業(yè)造成數(shù)億元經(jīng)濟(jì)損失.特別是病毒性的草魚出血病,流行季節(jié)長(zhǎng),發(fā)病死亡率高,因此,對(duì)草魚出血病的有效防治一直是世界各國(guó)水產(chǎn)科學(xué)工作者艱苦探索而又未能找到理想解決辦法的世界性難題.現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)突飛猛進(jìn)的發(fā)展為我們切底解決這一難題提供了可能性和有效途徑.綜觀國(guó)內(nèi)外近些

2、年來(lái)對(duì)轉(zhuǎn)基因魚的研究及結(jié)果證明,通過(guò)轉(zhuǎn)基因定向培育出符合人們所需要的優(yōu)良魚種是完全可能的,也是十分有意義的.通過(guò)基因轉(zhuǎn)移進(jìn)行魚類抗病育種研究,是魚類轉(zhuǎn)基固研究中的一個(gè)新的方向. 實(shí)驗(yàn)通過(guò)將hu-α-IFN基因重組分子采用顯微注射法將這種重組基因轉(zhuǎn)化草魚1-2細(xì)胞期的受精卵,即以Narashige顯微注射儀,將5nl DNA(約10<'6>~10<'7>分子)直接注射到選擇好的受精卵核的動(dòng)物極上.2000年共顯微注射32197粒草魚受精卵

3、,出苗12945尾草魚魚苗,經(jīng)孵化培育最后獲得1120尾五寸左右草魚,對(duì)1120尾草魚提取血液總DNA進(jìn)行PCR和Southern雜交檢測(cè),2000年轉(zhuǎn)導(dǎo)的草魚的PCR檢測(cè)結(jié)果,有672尾草魚即60﹪轉(zhuǎn)化個(gè)體的總DNA能擴(kuò)增出一條485kb的特異分子帶,說(shuō)明轉(zhuǎn)化個(gè)體整合有hu-α-IFN基因,經(jīng)Southern雜交進(jìn)一步證實(shí),轉(zhuǎn)入的抗病相關(guān)基因已在轉(zhuǎn)基因草魚體內(nèi)染色體上得以整合,但整合位點(diǎn)沒(méi)有固定區(qū)域,整合的拷貝數(shù)存在較大差異.對(duì)PCR