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1、ZhejiangAgricultureandForestryUniversityDissertationfortheDegreeofMasterFunctionalanalysisofauxinresponsefactorgeneCcARFinhickory(Caryacarthayensis)duringgraftprocessCandidate:JiaFangSupervisor:BingsongZhengSpeciality:Si
2、lvicultureDateofSubmission:June,2013ZhejiangAgricultureLintanlZhejiangandForestryUniversityProvince,PRChinaJune,2013g摘要摘要山核桃(CaryacathayensisSarg)為胡桃科(Juglandaceae)山核桃屬(CaryaNutt)的木本油料樹種,作為浙西北的特色干果,經(jīng)濟價值很高,是山區(qū)農(nóng)民脫貧致富的經(jīng)濟支柱之
3、一。但是山核桃存在童期長,樹體高大,不易采收,良種化以及園藝化栽培困難等問題,構(gòu)成了山核桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個巨大瓶頸。植物嫁接作為植物無性繁殖中的一項重要園藝栽培技術(shù),是解決山核桃良種化和園藝化栽培的主要手段。隨著嫁接技術(shù)的逐步發(fā)展,人們已經(jīng)不單純滿足研究嫁接技術(shù),開始探討嫁接較深層次的問題,以便更好的指導(dǎo)嫁接。本文根據(jù)cDNAAFLP技術(shù)獲得的山核桃生長素響應(yīng)因子(C鰣燈)基因片段克隆獲得cDNA全長,同時進行同源性比較和系統(tǒng)樹分析,并利
4、用qRTPCR,WesternNoR分析在嫁接過程中CcARF基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達情況,并進行IAA氧化酶活性檢測,探討CcARF與激素之間的關(guān)系,完善山核桃嫁接過程中調(diào)控網(wǎng)絡(luò)機制i主要研究結(jié)果如下:1、利用改良的CTABTrizol,Trizol,RNAisomateforPlantTissue試劑盒法提取嫁接樣品總RNA,改良的CTABTrizol提取的總RNA質(zhì)量高、完整性好、雜質(zhì)少,適用于基因全長的克隆和qRTPCR;2、
5、克隆得到的CcARFcDNA全長從起始密碼子atg,到終止密碼子taa共2337個堿基,編碼778個氨基酸,CcARF與19種樹種25個基因同源性比對,該基因與其他植物ARF基因同源性較高,保守區(qū)域集中在ARF蛋白flOB3DNA結(jié)合域(DBD)。系統(tǒng)進化樹表明CcARF與蓖麻基因的親緣關(guān)系最近,葡萄基因次之,與楊樹的親緣關(guān)系較遠。3、利用定量RTPCR技術(shù),對不同處理(空白對照,4mg/lIAA,和0399/lNPA)在不同嫁接時期(
6、Od,ld,3d,5d,7d,14d)山核桃C叫肚基因的表達進行分析。結(jié)果表明:在對照中,山核杉gCcA髓因的表達量從嫁接前到嫁接后1d急劇下降,在隨后的2d里,該基因的表達量在接穗中上升明顯,然后下降。在砧木中,嫁接1d后,該基因表達量急劇下降,在隨后的6d里表達量上升明顯。嫁接7d后,Cd腿因的轉(zhuǎn)錄水平達到最高,然后下降。通過IAA處理山核杉LCcARF基因的表達量從嫁接前到嫁接后3d急劇下降,在隨后的11d里,該基因的表達量在接穗
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