莧色藜NDR1基因在轉(zhuǎn)基因水稻中的表達及功能分析.pdf

1、NDR1（non-race-specific disease resistance）基因在植物的防御反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，介導(dǎo)植物的廣譜抗病特性。本實驗室以特色抗病植物莧色藜為材料，鑒定并克隆與該基因同源的兩個基因并分別命名為CaNDR1a和CaNDR1b，轉(zhuǎn)CaNDR1a、CaNDR1b基因的轉(zhuǎn)基因煙草對植物病毒具有一定的抗性。在此基礎(chǔ)上，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，將CaNDR1a與CaNDR1b基因分別轉(zhuǎn)入水稻材料日本晴中，獲得轉(zhuǎn)基因

2、株系并進行室內(nèi)和田間白葉枯抗性鑒定。試驗結(jié)果總結(jié)如下：
　　1)分別構(gòu)建含有CaNDR1a、CaNDR1b基因的植物表達載體。經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化獲得轉(zhuǎn)NDR1基因水稻株系，PCR及southern雜交證明CaNDR1a、CaNDR1b基因已整合到水稻基因組中。
　　2)設(shè)計白葉枯病菌接種濃度梯度進行預(yù)實驗，確定合適的白葉枯病菌接種濃度。田間培養(yǎng)T0代水稻，收集種子并再次種植，獲得T1代水稻。隨機選取部分T1代轉(zhuǎn)基因水稻株

3、系進行抗病鑒定，記錄接種后3天、5天、10天的葉片病斑長度，統(tǒng)計數(shù)據(jù)。從中挑選出抗病效果較好的株系重復(fù)實驗。結(jié)果表明:轉(zhuǎn)CaNDR1a、CaNDR1b基因水稻對白葉枯病有一定的抗性，可延遲發(fā)病。
　　3)利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測各轉(zhuǎn)基因水稻株系CaNDR1基因的表達量，并用日本晴做對照。結(jié)合抗病鑒定結(jié)果分析數(shù)據(jù)，表明轉(zhuǎn)基因水稻植株中外源基因的表達量明顯高于對照株系，抗病性較好株系CaNDR1基因的表達量并不高。
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