AFB1、OTA、DON高效液相色譜檢測方法的優(yōu)化和應(yīng)用.pdf

1、真菌毒素是真菌在生長過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，對人和動物都有害。真菌毒素會通過被污染的谷物、飼料和由這些飼料喂養(yǎng)的動物所提供的動物性食品進(jìn)入我們的食物鏈，從而對人畜表現(xiàn)出致癌性、遺傳毒性、致畸性，不僅影響動物的生長、生產(chǎn)，同時(shí)對人類也產(chǎn)生巨大的危害。但是，真菌毒素的產(chǎn)生是不能完全避免的，因此準(zhǔn)確的檢測真菌毒素的含量，對于進(jìn)一步對真菌毒素進(jìn)行降毒、去毒研究顯得尤為重要。黃曲霉毒素，被世界衛(wèi)生組織(WHO)癌癥研究機(jī)構(gòu)劃分為1類致癌物，是一

2、種毒性極強(qiáng)的物質(zhì)。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，是一種全球性的谷物污染物，對谷物的污染率和污染水平較其他鐮刀菌毒素高，居首位。赭曲霉毒素A對動物有很強(qiáng)的肝腎毒性，容易積累在畜禽體內(nèi)，在畜禽體內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定，不易代謝和降解，從而通過食物鏈對人類產(chǎn)生危害。OTA在世界范圍造成的經(jīng)濟(jì)損失僅次于黃曲霉毒素。
　　 本論文主要研究黃曲霉毒素B1(AFB1)，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)和赭曲霉毒素A(OTA)的高效液相色譜檢測方法的優(yōu)化和應(yīng)用。為高效、

3、快速、準(zhǔn)確的檢測AFB1、DON、OTA提供技術(shù)支持。
　　 試驗(yàn)一AFB1高效液相色譜檢測方法的優(yōu)化
　　 優(yōu)化了高效液相色譜定量檢測飼料中AFB1的方法。優(yōu)選確定了甲醇∶水(體積70∶30)為最佳提取溶液，優(yōu)選確定了色譜條件:流動相為乙腈∶水（體積30∶70），檢測波長（激發(fā)波長Ex=365 nm，發(fā)射波長Em=418 nm）。飼料樣品通過免疫親和柱除雜質(zhì)，HPLC定量分析，加標(biāo)回收率高達(dá)85～99％，檢測限為1.7

4、 ng(·)mL-1，定量限為5.67μg(·)kg-1，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)低于3.50％。
　　 試驗(yàn)二 DON高效液相色譜檢測方法的優(yōu)化
　　 優(yōu)化了高效液相色譜定量檢測飼料中DON的方法。優(yōu)選確定了超純水為最佳提取溶液，優(yōu)選確定了色譜條件:流動相為乙腈∶水（體積分?jǐn)?shù);15∶85），紫外檢測波長218nm。飼料樣品通過免疫親和柱除雜質(zhì)，HPLC定量分析，加標(biāo)回收率高達(dá)82～95％，檢測限為27 ng(·)mL-1

5、，定量限為90.0μg(·)kg-1，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)低于3.68％。
　　 試驗(yàn)三OTA高效液相色譜檢測方法的優(yōu)化
　　 優(yōu)化了OTA的高效液相色譜檢測方法。優(yōu)選了提取溶液為乙腈∶水（體積60∶40），優(yōu)選確立的色譜檢測條件為:流動相是乙腈∶水∶醋酸(體積比)=50∶48∶2，激發(fā)波長(Ex)是333 nm，發(fā)射波長是(Em)是460 nm。飼料樣品采用OTA免疫親和柱凈化，HPLC定量分析，加標(biāo)回收率可達(dá)85～

6、96％,檢測限是0.038 ng·mL-1，定量限為0.127μg·kg-1，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)低于3.61％。
　　 實(shí)驗(yàn)四飼料中AFB1、DON、OTA污染調(diào)查
　　 試驗(yàn)使用優(yōu)化的高效液相檢測方法，檢測了來自全國17個(gè)省送檢的共270份飼料原料和包括配合飼料、濃縮飼料、預(yù)混飼料在內(nèi)的300份飼料中AFB1、DON、OTA的含量，結(jié)果顯示:總體來看，AFB1、DON、OTA的檢出率都處于一個(gè)較高水平，其中DON的