蘋果多酚的高效液相色譜檢測方法的建立.pdf

1、建立了蘋果中九種多酚物質(zhì)的HPLC(高效液相色譜)檢測方法。根據(jù)中性酚和酸性酚在結(jié)構(gòu)及性質(zhì)上的差異，采用不同的流動相體系、不同的柱溫、不同的吸收波長等不同的色譜條件來分別分離多種中性酚和酸性酚以及測定其含量。先對七種中性酚標準品和兩種酸性酚標準品的色譜分離條件分別進行了探索和優(yōu)化，最終確定色譜柱選用C18色譜柱，流動相用2mM磷酸水溶液和甲醇，分別建立起蘋果中中性酚和酸性酚的HPLC檢測方法。本文以市售小國光蘋果和紅富士蘋果為試材，將蘋

2、果果實分為果皮、果肉和果核三部分，冷凍干燥后，粉碎并真空包裝，冷藏保存。提取蘋果中的多酚時，為避免將糖類等物質(zhì)共同提取出來而影響多酚的純化和測定，采用乙酸乙酯為提取劑，將蘋果多酚從樣品的水溶液中提取出來。根據(jù)中性酚和酸性酚在不同pH條件下的存在狀態(tài)不同，確立了用乙酸乙酯在pH=2.0時分離提取酸性酚，在pH=7.0時分離提取中性酚。利用所建立的HPLC方法分別準確測定了小國光蘋果和紅富士蘋果的果皮、果肉和果核中酸性酚、中性酚的種類和含量

3、，并比較了不同蘋果品種、蘋果不同部位所含多酚的種類和含量的差異。本文所建立的蘋果多酚的HPLC的檢測方法對蘋果多酚含量的準確測定可以對蘋果多酚的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。 結(jié)果表明： 1．中性酚的分離采用濃度梯度洗脫，60分鐘內(nèi)甲醇的濃度從2％升為40％，相應(yīng)的磷酸溶液濃度從98％降為60％：最大吸收波長為280nm，柱溫為40℃，以及在采用不同流速的條件下，七種物質(zhì)的峰得到了較好的分離，分離度均大于1.5。 2．酸

4、性酚的分離以30％的2mM磷酸水溶液和70％的甲醇作為流動相，柱溫為25℃，最大吸收波長為320 rlfn，兩種酸性酚完全分離，分離度為2.5。 3．該方法的最低檢出限為0.022～0.072μg，加標回收率均大于90％，相對標準偏差為1.1％～2.4[％]，說明該方法準確可靠。 4．蘋果中多酚含量較多的是(+)兒茶素、(一)表兒茶素、果皮中的蘆丁、綠原酸和p-香豆酸；果皮中中性酚的含量都高于果肉和果核中中性酚的含量

5、；但對酸性酚而言，果核中酸性酚的含量高于果皮和果肉中酸性酚的含量；蘆丁和槲皮素在小國光蘋果的果肉和果核中未檢測出來。 紅富士蘋果果皮中中性酚含量最高，果核中酸性酚含量最高：蘆丁在果核中未檢測出，槲皮素在果肉和果核中皆未檢測出。 在果皮中，小國光蘋果中中性酚和酸性酚的含量都高于紅富士蘋果中多酚的含量：在果肉中，在小國光蘋果(+)一兒茶素的含量比紅富士蘋果中的含量要低。果核中兩種蘋果中中性酚的含量相差不大，但酸性酚的含量差