蘋果多酚的高效液相色譜檢測(cè)方法的建立.pdf

1、建立了蘋果中九種多酚物質(zhì)的HPLC(高效液相色譜)檢測(cè)方法。根據(jù)中性酚和酸性酚在結(jié)構(gòu)及性質(zhì)上的差異，采用不同的流動(dòng)相體系、不同的柱溫、不同的吸收波長(zhǎng)等不同的色譜條件來(lái)分別分離多種中性酚和酸性酚以及測(cè)定其含量。先對(duì)七種中性酚標(biāo)準(zhǔn)品和兩種酸性酚標(biāo)準(zhǔn)品的色譜分離條件分別進(jìn)行了探索和優(yōu)化，最終確定色譜柱選用C18色譜柱，流動(dòng)相用2mM磷酸水溶液和甲醇，分別建立起蘋果中中性酚和酸性酚的HPLC檢測(cè)方法。本文以市售小國(guó)光蘋果和紅富士蘋果為試材，將蘋

2、果果實(shí)分為果皮、果肉和果核三部分，冷凍干燥后，粉碎并真空包裝，冷藏保存。提取蘋果中的多酚時(shí)，為避免將糖類等物質(zhì)共同提取出來(lái)而影響多酚的純化和測(cè)定，采用乙酸乙酯為提取劑，將蘋果多酚從樣品的水溶液中提取出來(lái)。根據(jù)中性酚和酸性酚在不同pH條件下的存在狀態(tài)不同，確立了用乙酸乙酯在pH=2.0時(shí)分離提取酸性酚，在pH=7.0時(shí)分離提取中性酚。利用所建立的HPLC方法分別準(zhǔn)確測(cè)定了小國(guó)光蘋果和紅富士蘋果的果皮、果肉和果核中酸性酚、中性酚的種類和含量

3、，并比較了不同蘋果品種、蘋果不同部位所含多酚的種類和含量的差異。本文所建立的蘋果多酚的HPLC的檢測(cè)方法對(duì)蘋果多酚含量的準(zhǔn)確測(cè)定可以對(duì)蘋果多酚的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。 結(jié)果表明： 1．中性酚的分離采用濃度梯度洗脫，60分鐘內(nèi)甲醇的濃度從2％升為40％，相應(yīng)的磷酸溶液濃度從98％降為60％：最大吸收波長(zhǎng)為280nm，柱溫為40℃，以及在采用不同流速的條件下，七種物質(zhì)的峰得到了較好的分離，分離度均大于1.5。 2．酸

4、性酚的分離以30％的2mM磷酸水溶液和70％的甲醇作為流動(dòng)相，柱溫為25℃，最大吸收波長(zhǎng)為320 rlfn，兩種酸性酚完全分離，分離度為2.5。 3．該方法的最低檢出限為0.022～0.072μg，加標(biāo)回收率均大于90％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1％～2.4[％]，說明該方法準(zhǔn)確可靠。 4．蘋果中多酚含量較多的是(+)兒茶素、(一)表兒茶素、果皮中的蘆丁、綠原酸和p-香豆酸；果皮中中性酚的含量都高于果肉和果核中中性酚的含量

5、；但對(duì)酸性酚而言，果核中酸性酚的含量高于果皮和果肉中酸性酚的含量；蘆丁和槲皮素在小國(guó)光蘋果的果肉和果核中未檢測(cè)出來(lái)。 紅富士蘋果果皮中中性酚含量最高，果核中酸性酚含量最高：蘆丁在果核中未檢測(cè)出，槲皮素在果肉和果核中皆未檢測(cè)出。 在果皮中，小國(guó)光蘋果中中性酚和酸性酚的含量都高于紅富士蘋果中多酚的含量：在果肉中，在小國(guó)光蘋果(+)一兒茶素的含量比紅富士蘋果中的含量要低。果核中兩種蘋果中中性酚的含量相差不大，但酸性酚的含量差