小麥麥谷蛋白基因調(diào)控區(qū)的分離與功能鑒定.pdf

1、麥谷蛋白是普通小麥（TriticumaestivumL.）中的聚合蛋白質(zhì)，賦予面粉獨特的粘彈性。大部分關(guān)于麥谷蛋白的研究都集中于研究各類亞基的性質(zhì)，基因組定位以及其在面粉加工中的性質(zhì)。然而，對于麥谷蛋白基因的全長啟動子序列的研究較少。本課題中，我們設(shè)計了基因特異性引物，使用PCR方法從模式小麥中國春中擴增了10個麥谷蛋白基因的全長啟動子序列，包括6個高分子量麥谷蛋白亞基基因啟動子與4個低分子量麥谷蛋白亞基基因啟動子。這些啟動子序列的長度

2、約為1361～2554bp。高分子量麥谷蛋白亞基基因啟動子與低分子量麥谷蛋白亞基基因啟動子間的序列多態(tài)性主要為插入/缺失以及堿基突變。我們發(fā)現(xiàn)，麥谷蛋白基因啟動子所含順式作用元件存在序列間保守性，高分子量麥谷蛋白亞基與低分子量麥谷蛋白亞基基因的啟動子則各自存在獨特的順式作用元件組合。與低分子量麥谷蛋白亞基基因啟動子相比，高分子量麥谷蛋白亞基基因啟動子在5'遠端(＞-700)含有更多的功能順式作用元件。此外，x型高分子量麥谷蛋白亞基與y型

3、高分子量麥谷蛋白亞基的啟動子序列存在各自的保守性。我們還發(fā)現(xiàn)了一些與種子儲藏蛋白基因相關(guān)的重要順式作用元件，這些順式作用元件位于啟動子序列的遠端，包括5'-UTRPy-richstretch-likemotif和as-2box-likemotif使用缺體四體系進行定位分析的結(jié)果表明，除Glu-B3-1外，其他啟動子的定位與之前的預期一致。綜上所述，這些結(jié)果有助于深入理解麥谷蛋白的表達調(diào)控的機理，同時有助于利用分子設(shè)計育種方法以提高小麥品

4、質(zhì)。
　　 此外，我們還擴增了2個高分子量麥谷蛋白亞基基因的3'非翻譯區(qū)(3'-UTR)序列，并利用Ubiquitin啟動子，不同長度的高分子量麥谷蛋白亞基基因啟動子，β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因編碼區(qū)，高分子量麥谷蛋白亞基基因終止子以及Nos終止子進行了不同組合，構(gòu)建了5種表達載體，轉(zhuǎn)化小麥幼嫩的種子，瞬時表達分析的結(jié)果表明，全長啟動子比核心啟動子具有更高的啟動效率;兩種終止子的作用差異不顯著。同時，利用莖尖轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)化濟麥