小麥DREB轉(zhuǎn)錄因子與冷激蛋白基因功能鑒定.pdf

1、干旱、高鹽和低溫等非生物脅迫是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的主要限制因子，造成我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)減產(chǎn)的主要因素。植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過程中，形成了一套嚴(yán)密而復(fù)雜的分子機(jī)制以減少或避免脅迫環(huán)境帶來的危害。近些年，對(duì)植物的抗逆機(jī)制研究取得了一定進(jìn)展，通過分子生物學(xué)手段進(jìn)行作物抗逆育種也越來越被研究者重視。轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育、植物逆境信號(hào)傳遞和相關(guān)功能基因表達(dá)中起到重要作用。
　　DREB轉(zhuǎn)錄因子能夠與 DRE/CRT順式作用元件發(fā)生特異性結(jié)合，激活抗

2、逆相關(guān)基因的表達(dá)，提高植物的抗逆性。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了DREB轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)特異性分析和互作候選蛋白的篩選以及冷激蛋白基因的功能分析。
　　1. DREB轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)分析。經(jīng)過ABA、高鹽和干旱脅迫處理的小麥幼苗提取RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)DREB2和DREB9轉(zhuǎn)錄因子基因進(jìn)行表達(dá)特性分析。結(jié)果表明：DREB2和DREB9基因在各種脅迫條件下的響應(yīng)程度和響應(yīng)時(shí)間不同，并且DREB2和DREB9基因在ABA、干

3、旱和高鹽脅迫下的響應(yīng)強(qiáng)烈，因此DREB2和DREB9基因在ABA、干旱和高鹽非生物脅迫應(yīng)答反應(yīng)中起到重要作用。
　　2. TaDREB6基因互作蛋白的篩選。研究證實(shí)TaDREB6基因在干旱脅迫應(yīng)答反應(yīng)過程中起調(diào)控作用。本研究構(gòu)建了小白麥cDNA文庫，以TaDREB6為誘餌，利用酵母雙雜交技術(shù)從小白麥cDNA文庫中篩選TaDREB6互作蛋白，對(duì)篩選到的候選陽性克隆進(jìn)行測(cè)序和比對(duì)分析，獲得與能量代謝、抗逆和防御、轉(zhuǎn)運(yùn)、轉(zhuǎn)錄和翻譯、信號(hào)

4、轉(zhuǎn)導(dǎo)以及生長(zhǎng)發(fā)育等相關(guān)的候選蛋白，為進(jìn)一步研究DREB介導(dǎo)的小麥抗逆機(jī)制提供了基礎(chǔ)。
　　3.轉(zhuǎn)W18基因小麥的獲得和冷激蛋白基因XuA和XuB的功能鑒定。構(gòu)建轉(zhuǎn)小麥表達(dá)載體，利用基因槍法把W18基因轉(zhuǎn)入小麥，對(duì) T0和T1代植株進(jìn)行了陽性檢測(cè)。共獲得128株T0代植株，含有目的基因的陽性株為12株，含有Bar基因的陽性株為12株。獲得120株T1代植株，含有目的基因的陽性植株為51株，含有Bar基因的陽性植株是43株。構(gòu)建XuA